綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因裸鼠的應(yīng)用.pdf

1、綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)是一種能夠自身催化形成生色團(tuán)并在藍(lán)光或紫外光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光的蛋白。綠色熒光蛋白具有熒光穩(wěn)定，檢測方便，對活細(xì)胞無傷害等優(yōu)點(diǎn)，已被作為一種標(biāo)記基因應(yīng)用到生物學(xué)研究的各個領(lǐng)域。系統(tǒng)性表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，可實(shí)現(xiàn)綠色熒光蛋白在小鼠全身各個組織器官中表達(dá)，尤其在胰腺、心臟、小腸、外周血細(xì)胞和腦組織等器官組織中表達(dá)量較高。將該小鼠與BALB/c裸小鼠雜交，通過多代篩

2、選建立穩(wěn)定的系統(tǒng)性表達(dá)綠色熒光的轉(zhuǎn)基因裸鼠。該小鼠具有裸鼠的特性并系統(tǒng)性表達(dá)綠色熒光蛋白，可以利用光學(xué)成像技術(shù)跟蹤靶細(xì)胞，是干細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞藥物臨床前研究的工具小鼠。針對此種綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因裸鼠，本研究主要從以下兩個方面展開：
　　 1．綠色熒光轉(zhuǎn)基因裸鼠接種紅色熒光蛋白標(biāo)記A549細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
　　 利用系統(tǒng)性表達(dá)綠色熒光蛋白的C57BL/6J小鼠與BALB/c裸小鼠多代雜交和互交，建立穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因

3、裸鼠。大體解剖觀察胸腺生長情況，整體和器官熒光成像驗(yàn)證綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。以2×106/只的劑量對6周齡的綠色熒光轉(zhuǎn)基因裸鼠皮下腋下接種表達(dá)紅色熒光蛋白的人類A549肺癌細(xì)胞(RFP-A549)，通過觀測腫瘤生長來驗(yàn)證模型的免疫缺陷性。同時，利用紅色熒光標(biāo)記的腫瘤和綠色宿主鼠，對雙色熒光的整體成像效果進(jìn)行觀測。并利用雙色熒光，在組織細(xì)胞水平對腫瘤部位細(xì)胞的來源進(jìn)行區(qū)分，探索腫瘤血管的來源，并觀測腫瘤對肺部的轉(zhuǎn)移情況。
　　

4、2．臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在綠色熒光裸鼠體內(nèi)的定位實(shí)驗(yàn)
　　 將紅色熒光蛋白標(biāo)記的人類臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(RFP-hUC-MSCs)和熒光素酶標(biāo)記的人類臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(LUC-hUC-MSCs)尾靜脈注射到綠色熒光裸鼠體內(nèi)，利用活體成像技術(shù)跟蹤uMSCs綠色熒光裸鼠體內(nèi)的分布和消退。在活體成像中，通過對同一組實(shí)驗(yàn)對象在不同時間點(diǎn)進(jìn)行記錄，跟蹤臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的移動及消退，可以消除個體差異，所得的數(shù)據(jù)更加真實(shí)可信。在實(shí)驗(yàn)中通過四氯化碳誘