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1、分類號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)中國科學(xué)院生物物理研究所博士后研究工作報(bào)告Geneticincorporationofchlorotyrosineforengineeringoffluorescentproteinandmyoglobin張維指導(dǎo)老師王江云研究員工作完成日期2Q!Q生2旦:2Q12生三旦中國科學(xué)院生物物理研究所(北京)2012年3月ABSTRACTRecently,ageneralmethodwasdevelopedthatmake
2、sitpossibletogeneticallyencodeunnaturalaminoacidswithdiversephysical,chemical,orbiologicalpropertiesinEscherichiacoli,yeast,andmammaliancellsMorethan50unnaturalaminoacidshavebeenincorporatedintoproteinswithhighfidelityan
3、defficiencybymeansofauniquecodonandcorrespondingtRNA/aminoacyltRNAsynthetasepairBythemethodintroducingarchaea’StyrosinetRNA/synthetaseasorthogonalpairintoEcoli,Wecanincorporate3chlorotyrosineintothespecificpositionofanyp
4、roteinsPosttranslationalchlorinationoftyrosineresiduesinproteinsproduce3chlorotyrosine(3一C1Tyr),whichisassociatedwithseveraldiseases,includingAlzheimer’Sdisease,asthma,atherosclerosisandacutemyocardialinfarctionHighlevel
5、of3chlorotyrosinehasbeenfoundinApoA1proteininatherosclerosispatients,indicatingthatitmayplayimportantroleindiseaseComparedtotyrosine(Yyr),3C1TyrhaslowerpKaWereplacedthegreenfluorescentprotein(GFP)andphotoactivatableprote
6、inmEOS2chromophoreTyr(Tyr66inGFPlby3C1一TyrloweringthechromophorepKato42and47,respectivelyThe64Hisor93HisofMyoglobinwasmutatedwith3一CI—TyrTyrand35一DiCI—TyrThe64Hismutatedproteinswascompetedbindingwithimidazole,anddenature
7、dbyureaTheresultshowedthatMyoglobin64ClTyrwasmorestable,andresistanttobindingofimidazoleBytheexperimentofHemincompetitionbinding,MB64C1一TyrhaveastrongerabilityofbindingHeminthanMB64YMB64ClTyrmayhavestrongerabilityoftrans
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