斜臥青霉114-2中阿魏酸酯酶基因的表達(dá)與鑒定研究.pdf

1、阿魏酸酯酶是半纖維素降解酶系的組成部分之一。它可以通過(guò)水解半纖維素中木聚糖的部分側(cè)鏈,從而打斷半纖維素之間、半纖維素與木質(zhì)素之間交聯(lián)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),使木質(zhì)纖維素的結(jié)構(gòu)變得松散,有利于生物質(zhì)的酶法降解和轉(zhuǎn)化。阿魏酸酯酶還可以從木質(zhì)纖維素材料中釋放出酚類化合物,如阿魏酸、對(duì)香豆酸、咖啡酸及芥子酸。這些酚類化合物已經(jīng)在食品、健康、化妝品、藥物領(lǐng)域得到青睞,尤其是阿魏酸在生物學(xué)上具有吸收UV、抗氧化、抗炎等活性,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品、食品、化

2、工等行業(yè)。因此,阿魏酸酯酶在飼料、造紙、生物轉(zhuǎn)化等多種行業(yè)都有廣泛的應(yīng)用前景。
　　本論文中,利用本實(shí)驗(yàn)室所篩選的一株纖維素酶高產(chǎn)菌株斜臥青霉114-2,在了解該菌株全基因組序列的基礎(chǔ)上,希望鑒定其中的阿魏酸酯酶的基因,并通過(guò)克隆表達(dá)獲得阿魏酸酯酶,以提高該菌株所產(chǎn)酶液對(duì)木質(zhì)纖維素材料的降解能力。首先對(duì)已知的斜臥青霉114-2的基因組做BLAST蛋白序列比對(duì),篩選查找出四個(gè)同源性較高的的阿魏酸酯酶基因序列。
　　其次,采用畢

3、赤酵母GS115作為表達(dá)系統(tǒng),將假定阿魏酸酯酶基因PDE06649進(jìn)行了克隆與表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):基因PDE06649在GS115中得到了有效的表達(dá),并對(duì)該表達(dá)的蛋白做了酶學(xué)性質(zhì)的分析。
　　為了避免因?yàn)樘腔虿徽_的修飾所帶來(lái)的外源蛋白活性的丟失,論文利用斜臥青霉尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷體M12作為表達(dá)載體,成功地構(gòu)建了M12-09278、M12-09178、M12-08709的重組菌株,研究發(fā)現(xiàn)M12-09278重組菌能夠表達(dá)目的蛋白09