馬鈴薯PTOM1基因全長(zhǎng)cDNA的克隆及其RNAi轉(zhuǎn)基因植株的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、在Genebank中搜索到與擬南芥中支持煙草花葉病毒復(fù)制的基因TOM1序列具部分同源的馬鈴薯EST序列.用特異性引物和RACE方法,從馬鈴薯(F-28-1)中克隆到與擬南芥AtTOM1基因具同源性的馬鈴薯PTOM1基因,PTOM1全長(zhǎng)cDNA有1257個(gè)堿基對(duì),編碼245個(gè)氨基酸,是一個(gè)含有五個(gè)跨膜區(qū)結(jié)構(gòu)的蛋白.PTOM1 cDNA與擬南芥AtTOM1 cDNA有59.1％的同源性.二者的編碼產(chǎn)物有70.3%的同源性.為了研究PTOM1

2、基因在RNA病毒侵染馬鈴薯過(guò)程中的作用,構(gòu)建了以下一系列的植物表達(dá)載體和病毒表達(dá)載體:(1)將PTOM1 cDNA反義構(gòu)建于表達(dá)載體;(2)將PTOM1cDNA分為兩段分別構(gòu)建RNA干涉質(zhì)粒;(3)用基因組PTOM1基因片段構(gòu)建反義表達(dá)載體;(4)將PTOM1 cDNA反義構(gòu)建于病毒表達(dá)載體PTV00.將用上述方法得到的表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌并用于侵染馬鈴薯得到轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株,PCR檢測(cè)表明外源基因已整合入馬鈴薯染色體上.同時(shí),我們建立了

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