百脈根BIO ORGANS及其突變基因轉(zhuǎn)化煙草及矮牽牛的研究.pdf

1、BIO ORGANS（BIO）由百脈根中克隆得到，調(diào)控花器官的對稱性以及器官的大小，其突變的截斷基因bio來自于大規(guī)模的EMS誘變，目前對該兩個基因還未進行深入研究。本實驗利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法把BIO及其突變基因bio定向?qū)霟煵荩∟icotianatobacum）以及矮牽牛（Petuniahybrida）中，以研究其對花器官發(fā)育的影響，并對轉(zhuǎn)基因植株的營養(yǎng)生長及生殖生長進行觀察，以期為進一步研究該基因的功能及調(diào)控機理提供實驗依據(jù)。主要

2、結(jié)果如下：
　　 1.將BIO及其突變基因bio定向?qū)霟煵葜?，共獲得18株轉(zhuǎn)BIO基因煙草植株以及21株轉(zhuǎn)其突變基因bio煙草植株。轉(zhuǎn)BIO及轉(zhuǎn)bio植株表型具有一定的相似性：與野生型相比，轉(zhuǎn)基因植株的生長周期顯著縮短；接近一半的葉片出現(xiàn)缺刻或呈現(xiàn)一個葉片向兩個葉片分裂的趨勢；花冠顏色變淺，花器官大小、數(shù)目、形態(tài)等都表現(xiàn)出了一定的變化。不同的是：與野生型相比，轉(zhuǎn)BIO植株明顯矮化，器官變小，而轉(zhuǎn)bio植株株高變高，器官變大。<

3、br>　　 2.通過激素配比試驗確立了矮牽牛的轉(zhuǎn)基因體系，同時證實6-BA有利于組培苗的增殖、NAA有利于愈傷以及不定芽的誘導(dǎo)。MS培養(yǎng)基比較適合于矮牽牛的播種；MS+0.1mg/L6-BA培養(yǎng)基適合于矮牽牛的快速繁殖或繼代培養(yǎng)；MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA的培養(yǎng)基最適合矮牽牛愈傷以及芽的誘導(dǎo)，可用于轉(zhuǎn)基因中的預(yù)培養(yǎng)至初步篩選階段。
　　 3.利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法定向的將BIO及其突變基因bio導(dǎo)入了矮牽

4、牛中，并對轉(zhuǎn)基因苗進行了PCR以及RT-PCR鑒定。表型觀察結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)BIO及其突變基因bio的植株葉片邊緣均呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)，部分葉片缺刻，出現(xiàn)由一個葉片向兩個葉片分裂的趨勢。其中轉(zhuǎn)BIO基因植株部分葉片面積減小，葉片變窄或幾乎只剩主葉脈。
　　 通過轉(zhuǎn)基因煙草以及矮牽牛表型分析顯示，BIO基因參與了植株形態(tài)建成的多個方面，包括植株的高度、葉片以及花器官的形態(tài)等，同時推測bio基因缺失的一段序列可能對調(diào)控器官大小起著重要的作用