農(nóng)桿菌介導(dǎo)的百脈根轉(zhuǎn)化方法研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、百脈根(Lotus corniculatus Linn)是多年生豆科百脈根屬草本植物,原產(chǎn)于歐、亞兩大洲溫暖地區(qū),現(xiàn)世界各國廣泛栽培利用。百脈根不僅具有耐踐踏,再生性強,耐旱力強、耐牧等優(yōu)點,而且其青綠期長、飼草質(zhì)量高,不會引起家畜膨脹病,為一般豆科牧草所不及。百脈根在其生長環(huán)境中經(jīng)常受到低溫、干旱和高鹽的脅迫,如何提高百脈根的抗逆性具有十分重要的現(xiàn)實意義。本實驗的目的就是建立百脈根的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法,為今后轉(zhuǎn)基因研究奠定基礎(chǔ)。本實驗以

2、紫花苜蓿DREB基因的植物表達(dá)載體為材料,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,進(jìn)行百脈根轉(zhuǎn)化方法的研究。
  試驗研究表明,采用百脈根的子葉為侵染的外植體,預(yù)培養(yǎng)2d,農(nóng)桿菌OD600為0.2-0.4時侵染外植體5min,共培養(yǎng)2d后,轉(zhuǎn)移到含350mg/L Cef愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),20mg/L Kan+350mg/L Cef進(jìn)行延遲篩選,然后進(jìn)行分化和生根的遺傳轉(zhuǎn)化體系。獲得的轉(zhuǎn)基因苗通過做PCR檢測,初步獲得PCR檢測為陽性的

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