微柱陣列型拓?fù)浠讓H-SY5Y細(xì)胞VGCC功能響應(yīng)性影響及其機制的初步探究.pdf

1、為探究微柱陣列型拓?fù)浠子糜谡{(diào)控細(xì)胞VGCC功能響應(yīng)性的可行性，為以VGCC為靶標(biāo)的新型藥物篩選平臺的構(gòu)建提供必要的理論支撐。本文利用微加工技術(shù)制備了直徑為2μm和4μm，間距為2μm和7μm，高度為4μm的PLLA微柱陣列基底，利用掃描電子顯微技術(shù)與熒光定量技術(shù)研究了微柱陣列基底對SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)、骨架與粘著斑蛋白的影響，利用MTS研究了SH-SY5Y細(xì)胞在微柱陣列基底上的增殖活性，結(jié)合鈣離子染料Calcium Green-1A

2、M與激光共聚焦技術(shù)研究了微柱陣列基底對SH-SY5Y細(xì)胞VGCC功能響應(yīng)性的影響，利用qPCR技術(shù)與熒光定量技術(shù)研究了VGCC在mRNA層次與蛋白層次的表達(dá)在VGCC功能響應(yīng)微柱陣列基底中的作用，改進(jìn)了TMRM法測定細(xì)胞膜電位的方法并研究了細(xì)胞膜電位在VGCC功能響應(yīng)微柱陣列基底中的作用。
　　研究結(jié)果顯示，微柱陣列基底對SH-SY5Y細(xì)胞的形態(tài)具有非常顯著的影響，當(dāng)細(xì)胞在小而密的微柱上時，細(xì)胞傾向于浮于微柱頂部生長，細(xì)胞圓度較大

3、，隨著微柱間距的增大，細(xì)胞陷于微柱中，粗的微柱阻礙細(xì)胞鋪展，而細(xì)的微柱為細(xì)胞提供了黏附點，促進(jìn)細(xì)胞鋪展，甚至有微柱刺入細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中，然而這種細(xì)胞形態(tài)的變化并沒有對細(xì)胞增殖產(chǎn)生顯著影響。與細(xì)胞在平面基底上相比，在微柱基底上細(xì)胞粘著斑與骨架分布的典型特征是圍繞微柱或于微柱頂端集中表達(dá)，微柱的存在破壞了細(xì)胞骨架分布的有序性。SH-SY5Y細(xì)胞VGCC功能響應(yīng)性在平面、2-2與2-7基底上差異顯著，這種變化趨勢與細(xì)胞鋪展面積變化趨勢存在一定

4、相關(guān)性，細(xì)胞鋪展面積越大，VGCC功能響應(yīng)越強，然而這種VGCC功能響應(yīng)性差異并不與VGCC通道表達(dá)差異所對應(yīng)，在細(xì)胞鋪展面積大的基底上，VGCC通道的表達(dá)反而趨向于降低。本實驗改進(jìn)了利用TMRM測定膜電位時，細(xì)胞核非特異性吸附的擬合方法，提高了計算精度。測量結(jié)果表明雖然微柱陣列基底對細(xì)胞膜電位具有顯著影響，但這種變化并不與VGCC功能響應(yīng)性差異所對應(yīng)。
　　實驗結(jié)果表明，利用微柱陣列基底調(diào)控細(xì)胞VGCC功能響應(yīng)性是完全可行的，但