毛細(xì)管電泳—電化學(xué)發(fā)光在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用探索.pdf

1、目的:
　　建立CE-ECL方法檢測(cè)血漿中順苯磺酸阿曲庫(kù)銨及順苯磺酸阿曲庫(kù)銨的代謝物;建立CE-ECL間接檢測(cè)法，檢測(cè)兒茶酚胺(CA)和其代謝產(chǎn)物間甲腎上腺素類(lèi)物質(zhì)(MNs)，應(yīng)用于嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷。
　　方法:
　　1.以羅庫(kù)溴銨作為內(nèi)標(biāo)，用高氯酸沉淀血漿蛋白，利用序貫均勻設(shè)計(jì)法考察分離條件，建立CE-ECL法對(duì)順苯磺酸阿曲庫(kù)銨及其代謝物進(jìn)行分離檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)所用分離緩沖液為含12％乙腈的24 mmol/L磷酸緩沖液(

2、PBS)(pH2.9)，分離電壓設(shè)為13 kV，進(jìn)樣電壓為16 kV，進(jìn)樣時(shí)間為3s。ECL檢測(cè)池中為含2 mmol/L三聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy)2+3)的100 mmol/L PBS(pH8.5)。
　　2.利用猝滅電化學(xué)發(fā)光法對(duì)腎上腺素類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)所用分離緩沖液為含6μmol/L三丙胺(TPA)的30 mmol/L PBS(pH7.9)，分離電壓為17 kV，進(jìn)樣電壓為16 kV，進(jìn)樣時(shí)間為5s。ECL檢測(cè)池中為含0

3、.5 mmol/L Ru(bpy)2+3的100 mmol/L PBS緩沖液(pH8.5)。
　　3.利用甲醛對(duì)間甲腎上腺素類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行衍生，使一級(jí)胺和二級(jí)胺變?yōu)槿?jí)胺，提高其靈敏度，并用硼酸鹽緩沖體系作為背景，消除其酚基的猝滅效果，進(jìn)一步提高信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)所用分離緩沖液為100 mmol/L硼酸鹽緩沖液(pH8.5)，分離電壓為17 kV，進(jìn)樣電壓為16 kV，進(jìn)樣時(shí)間為10s。ECL檢測(cè)池中為含2 mmol/L Ru(bp

4、y)2+3的50mmol/L硼酸鹽緩沖液(pH8.5)。
　　結(jié)果:
　　1.CE-ECL檢測(cè)阿曲庫(kù)銨的線(xiàn)性范圍為0.100～40.0 mg/L，勞丹素的線(xiàn)性范圍為0.040～8.0 mg/L，所有成分檢測(cè)的遷移時(shí)間和ECL信號(hào)變異系數(shù)均小于3％，平均回收率為94.5～101.6％。
　　2.CE-ECL猝滅法檢測(cè)腎上腺素和去甲腎上腺素的線(xiàn)性范圍分別為33.0～3333.0μg/L and18.0～3380.0μg/L

5、，可用于嗜鉻細(xì)胞瘤病人尿液樣品腎上腺素類(lèi)物質(zhì)的分析。
　　3.CE-ECL法檢測(cè)間甲腎上腺素類(lèi)物質(zhì)的線(xiàn)性范圍為40.0～4000.0μg/L，可用于嗜鉻細(xì)胞瘤病人尿液樣品間甲腎上腺素類(lèi)物質(zhì)的分析，以及部分嗜鉻細(xì)胞瘤病人的血漿樣品檢測(cè)。
　　結(jié)論:
　　本課題建立了CE-ECL檢測(cè)血漿中順苯磺酸阿曲庫(kù)銨及其分解產(chǎn)物的方法，為順苯磺酸阿曲庫(kù)銨的藥代動(dòng)力學(xué)研究提供了極為簡(jiǎn)便的方法。初步建立了CE-ECL間接檢測(cè)兒茶酚胺類(lèi)物質(zhì)