SUMO修飾蛋白在分枝桿菌感染中的動態(tài)變化及抗海分枝桿菌天然化合物的初篩.pdf

1、目的：
　　（1）研究小泛素樣修飾物（SUMO）修飾蛋白在分枝桿菌感染金魚動物模型中的動態(tài)變化，探討 SUMO修飾與分枝桿菌致病的關系。
　?。?）在26種天然單體化合物中篩選出具有抗海分枝桿菌的天然單體化合物。
　　方法：
　?。?）金魚90條，隨機分為WT野生組30條，分枝桿菌細胞壁脂質結核菌醇二分枝菌酸（PDIM）突變組（FAD）30條，PBS對照組30條，將濃度為10^8 cfu/mL的菌懸液于金魚泄殖腔

2、附近進行腹腔注射，每條魚注射100μL，建立海分枝桿菌感染金魚模型，對照組金魚注射等量的無菌PBS溶液。通過HE、抗酸染色驗證該動物模型，觀察組織肉芽腫的形態(tài)。采用免疫組織化學染色對IL-6的表達進行定位和相對定量，應用Western Blot技術檢測IL-6、SUMO-1、UBC-9蛋白的表達。通過RT-PCR技術檢測TNF-α、IL-12、SUMO-1、UBC-9、SENP-1 mRNA表達水平變化。
　　（2）采用倍比稀釋法

3、進行海分枝桿菌體外藥物敏感試驗，測定天然單體單獨使用和與利福平聯(lián)合應用時對海分枝桿菌的最低抑菌濃度（MIC），并根據(jù)公式計算出部分抑菌濃度（FIC）值，判斷是否與利福平有協(xié)同作用。
　　結果：
　?。?）成功建立海分枝桿菌感染金魚模型。
　?。?）HE染色及抗酸染色結果顯示，金魚感染海分枝桿菌后有典型的類結核肉芽腫形成。鏡下見肉芽腫組織內(nèi)有大量海分枝桿菌存在。PBS對照組金魚均無肉芽腫結構形成，也未見海分枝桿菌存在。<

4、br>　?。?）免疫組織化學染色與Western Blot結果顯示，與PBS對照組比較，金魚在感染海分枝桿菌（WT和FAD組）后細胞因子IL-6表達增加，其中，WT組比FAD組增加更顯著。蛋白SUMO-1與UBC-9表達均有所升高，WT組比FAD組表達升高明顯，差異具有統(tǒng)計學意義。
　?。?）RT-PCR結果顯示，與 PBS對照組比較，WT組與FAD組的TNF-α、IL-12 mRNA表達增加，且WT組表達增加更明顯。SUMO-1

5、、UBC-9 mRNA表達水平均升高，WT組升高更顯著。與PBS對照組比較，WT組與FAD組SENP-1 mRNA表達水平均降低，WT組表達降低更明顯，差異有統(tǒng)計學意義。
　　（5）單獨體外藥物敏感試驗結果顯示：8種天然單體JM271、SDXQ2、SDXQ9、J43233、J22-1、Compound-1、SDX28、G565有一定抗海分枝桿菌活性。聯(lián)合藥物敏感試驗結果顯示，4種天然單體化合物SDX28、G565、H208、ZXQ

6、4p-1與利福平有不同程度的協(xié)同作用。
　　結論：
　　（1）分枝桿菌感染金魚后，可能通過其細胞壁脂質成分 PDIM/PGL調控SUMO修飾通路，介導炎性介質（如TNF-α、IL-6及IL-12等）表達上調，從而形成炎性肉芽腫，導致病變。
　?。?）本實驗初步篩選出了8種（JM271、SDXQ2、SDXQ9、J43233、J22-1、Compound-1、SDX28、G565）具有抗海分枝桿菌的天然單體化合物，且發(fā)現(xiàn)其