CD20和PD-L1雙靶向納米免疫體系的構(gòu)建及其抗淋巴瘤協(xié)同效應(yīng)機(jī)制研究.pdf

1、利妥昔單抗（Rituximab）于1997年被FDA批準(zhǔn)用于醫(yī)療使用，它是全球第一個(gè)被批準(zhǔn)用于臨床進(jìn)行非霍奇金淋巴瘤（NHL）治療的IgG1單克隆抗體。盡管Rituximab在前期腫瘤治療方面取得了一定的療效，但是，臨床治療中發(fā)現(xiàn)，抗CD20抗體在體內(nèi)的半衰期短，作用效果溫和，并且多次用藥后容易產(chǎn)生耐藥性。此外，由于免疫檢查點(diǎn)的存在，腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生免疫逃逸。因此，從抗體作用機(jī)制和腫瘤微環(huán)境出發(fā)，構(gòu)建多功能抗體提高其療效是臨床抗體靶向治

2、療亟待解決的問(wèn)題。近年來(lái)，隨著納米技術(shù)和材料科學(xué)的發(fā)展，基于納米載體技術(shù)的遞送系統(tǒng)為解決上述問(wèn)題提供了完美的解決方案。
　　本研究選用支化陽(yáng)離子高分子聚乙烯亞胺（PEI，分子量為750 kDa），在其側(cè)基NH2上修飾可與抗體反應(yīng)的橋聯(lián)鍵 MAL-PEG-SCM分子，并大量偶聯(lián)抗 CD20和 PD-L1抗體，構(gòu)建 CD20和 PD-L1分子雙靶向納米抗體團(tuán)簇體系(縮寫(xiě)簡(jiǎn)稱PEI-RTX-AZL)。動(dòng)靜態(tài)光散射儀（Dynamic La

3、ser Light Scattering, DLLS），透射電子顯微鏡（TEM），馬爾文zeta電位儀等的測(cè)試結(jié)果證明了抗體團(tuán)簇合成成功，其抗體的偶聯(lián)效率為63％，具有橢球拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)?？贵w團(tuán)簇與Daudi細(xì)胞的結(jié)合能力和解離能力的分析顯示，與Rituximab相比，其具有相似的結(jié)合能力，但是對(duì)CD20分子的解離能力明顯降低，也就是說(shuō)抗體團(tuán)簇可以更長(zhǎng)時(shí)間的結(jié)合在靶細(xì)胞表面，持續(xù)作用時(shí)間更持久，這為進(jìn)一步提升抗體療效打下了基礎(chǔ)。在體外抗腫瘤活

4、性研究中，發(fā)現(xiàn)抗體團(tuán)簇PEI-RTX-AZL對(duì)Daudi細(xì)胞除了具有增殖抑制和細(xì)胞毒性作用外，還具有的抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC）和程序性細(xì)胞死亡（PCD）作用。本課題進(jìn)一步的對(duì)抗體團(tuán)簇的抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行了探索。相比游離的母代抗體，抗體團(tuán)簇誘導(dǎo)Daudi細(xì)胞發(fā)生凋亡的過(guò)程可以概括為以下兩方面：一方面，抗 CD20抗體的 Fab段特異性靶向 CD20陽(yáng)性的Daudi細(xì)胞，通過(guò)抗體 Fc段與 NK細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞的 FcgR結(jié)

5、合，啟動(dòng) ADCC作用，效應(yīng)細(xì)胞攻擊靶細(xì)胞，使其裂解；并將抗PD-L1抗體遞送至腫瘤細(xì)胞表面，通過(guò)抗PD-L1抗體來(lái)阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路，恢復(fù)CTL細(xì)胞的抗腫瘤活性，兩種抗體協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用；另一方面，750 kDa的支狀長(zhǎng)鏈PEI在Rituximab抗體的靶向作用下，與CD20分子結(jié)合，使抗原發(fā)生交聯(lián)或抗原受限，誘導(dǎo)靶細(xì)胞內(nèi)的溶酶體破裂或分布彌散，釋放溶酶體組織蛋白酶B（Cathepsin B）進(jìn)入胞漿，Cathepsi

6、n B作用于線粒體，致使線粒體膜的通透性增大，從而釋放前凋亡分子（細(xì)胞色素C）進(jìn)入細(xì)胞漿，激活凋亡信號(hào)通路（如Caspase），誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)。對(duì)抗體團(tuán)簇的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)開(kāi)展了研究。為了更加直觀地觀察抗體團(tuán)簇在動(dòng)物水平的抗腫瘤作用，我們構(gòu)建了Balb/c裸鼠的皮下實(shí)體腫瘤模型，并對(duì)抗體團(tuán)簇PEI-RTX-AZL和單克隆抗體Rituximab的抑瘤效應(yīng)進(jìn)行了觀察和分析。研究表明，抗體團(tuán)簇組比單抗組具有更強(qiáng)的抗腫瘤效果，減輕腫瘤負(fù)