基于CD20啟動子驅(qū)動stTRAIL特異性表達的B-淋巴瘤基因治療的研究.pdf

1、基于基于CD20CD20啟動子驅(qū)動啟動子驅(qū)動stTRAILstTRAIL特異性特異性表達的表達的B淋巴瘤基因治療的研究淋巴瘤基因治療的研究TheheresearchofgenetherapytoresearchofgenetherapytoBlymphomalymphomausingstTRAILdrivenbyausingstTRAILdrivenbyaspecificCD20promotermediatedbyspecificCD2

2、0promotermediatedbyadenovirusvectadenovirusvect一級學科：一級學科：化學化學學科專業(yè)：應(yīng)用化學（藥）學科專業(yè)：應(yīng)用化學（藥）作者姓名：袁向飛作者姓名：袁向飛指導教師：王勁峰指導教師：王勁峰藥物科學與技術(shù)學院藥物科學與技術(shù)學院20122012年5月中文摘要中文摘要CD20是B淋巴細胞表面的特異性標志，90%以上的非霍奇金淋巴瘤（NHL）都來源于B淋巴細胞，具有B淋巴細胞的表型，因而CD20分子

3、成為治療BNHL的重要靶點。除了能夠特異性靶向CD20的單克隆抗體之外，CD20啟動子也擁有在B淋巴細胞中特異的活性，因而CD20啟動子有望用于在轉(zhuǎn)錄水平特異性調(diào)控治療蛋白的表達，對BNHL進行殺傷的基因治療。TRAIL是目前唯一一個已知的對腫瘤細胞有選擇性殺傷作用的細胞因子，腺病毒載體介導的TRAIL基因治療還具有“旁觀者”效應(yīng)的優(yōu)點。本研究根據(jù)上述種種，以CD20啟動子為轉(zhuǎn)錄水平的靶向；以stTRAIL為功能性治療蛋白；以腺病毒為介

4、導載體，旨在探索出一種針對B淋巴腫瘤具有特異性殺傷效果的基因治療方案，來豐富現(xiàn)有的治療手段我們首先從CD20陽性的BJAB細胞系的基因組DNA中克隆了一個447bp的CD20啟動子片斷，并鑒定了這個啟動子片斷具有在B淋巴腫瘤細胞內(nèi)的特異轉(zhuǎn)錄活性；隨后又人工合成了含有分泌信號異亮氨酸拉鏈sTRAIL（aa114aa281）的stTRAIL基因，該基因表達產(chǎn)物中的異亮氨酸拉鏈有助于促使sTRAIL形成具有生物學功能的同源三聚體結(jié)構(gòu)；最后將C

5、D20啟動子片斷stTRAIL基因真核poly（A）序列一整個轉(zhuǎn)錄單元裝入腺病毒載體系統(tǒng)AdEasy中，包裝出攜帶P20stTRAIL序列的腺病毒。我們證明了在用AdP20stTRAIL分別感染CD20陽性和陰性的細胞系之后，只有在CD20陽性的BJAB細胞中，才能在mRNA和蛋白兩個水平都檢測到stTRAIL的表達，在CD20陰性的細胞系中則完全檢測不到。同時在AdP20stTRAIL感染的BJAB細胞培養(yǎng)上清中也檢測到stTRAIL

6、蛋白，證明這個產(chǎn)物能夠分泌到細胞外。在接下來的體外功能性實驗中，我們發(fā)現(xiàn)BJAB細胞在被AdP20stTRAIL感染之后自身生長受到抑制，并且發(fā)生了明顯的凋亡現(xiàn)象。在對皮下接種了BJAB細胞的移植瘤小鼠模型的治療實驗中，原位注射了AdP20stTRAIL的腫瘤生長受到了明顯抑制。這些都進一步證明了這種腺病毒介導的CD20特異啟動子操控的stTRAIL基因表達的基因治療策略，在將來有望用于對BNHL的治療。關(guān)鍵詞：TRAIL，基因治療，特