關(guān)元、足三里穴位埋線調(diào)控Th17-Treg細(xì)胞平衡治療CIA大鼠的研究.pdf

1、目的：①觀察SD大鼠CIA模型血清中Th17／Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)情況，證實(shí)CIA模型中Th17／Treg細(xì)胞的相關(guān)細(xì)胞因子的平衡調(diào)控是否與RA病情相關(guān)，以明確Th17/Treg細(xì)胞在穴位埋線干預(yù)RA治療中的作用機(jī)制。②探討穴位埋線治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制：抑制Th17細(xì)胞及上調(diào)Treg細(xì)胞，而達(dá)到治療 RA的目的，其可能的作用機(jī)制是 TGF-β通過上調(diào)Foxp3的水平，內(nèi)源性TGF-β與炎癥介質(zhì)IL-6誘導(dǎo)RORγt表達(dá)促使

2、Th0細(xì)胞分化為 Thl7細(xì)胞的過程被抑制,而后隨著炎癥介質(zhì)如 IL-6含量的減少,RORγt的功能被Foxp3所抑制，同時(shí)促進(jìn)Th0細(xì)胞向Treg細(xì)胞的分化,維持Treg的功能的同時(shí)使Th17細(xì)胞的IL-21、IL-17的表達(dá)和分泌降低，抑制 IL-6，TNF-α，IL-1β分泌和表達(dá)。③穴位埋線治療可以有效緩解 RA患者關(guān)節(jié)炎癥狀、延緩關(guān)節(jié)破壞，保護(hù)和維持關(guān)節(jié)功能。
　　方法：1.分組造模：將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（初次免疫后

3、42天處死），模型組（初次免疫后42天處死）、來(lái)氟米特組、穴位埋線組，來(lái)氟米特+穴位埋線組，每?jī)苫\為一組，共5個(gè)組,每組8只。每籠按照隨機(jī)方式以苦味酸為材料(黃色)1～4進(jìn)行編號(hào)。按照文獻(xiàn)提供的方法稍加修改建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎大鼠模型。
　　2.治療方法：各組于造模第10天開始治療。
　　（1）空白組不作治療。
　　（2）模型組：予以生理鹽水1ml/d灌胃。
　　（3）穴位埋線組：參照“大鼠穴位圖譜”選取“關(guān)

4、元”及雙側(cè)“足三里”穴。從造模后第10天開始進(jìn)行穴位埋線操作。將0.5cm長(zhǎng)無(wú)菌羊腸線置入12號(hào)埋線針頭內(nèi)，大鼠腹面朝上固定與操作臺(tái)，拉伸雙后肢，將埋線針針頭刺入已常規(guī)消毒的“關(guān)元”及雙側(cè)“足三里”穴，將羊腸線完全置入穴內(nèi)。埋線操作3次，每14天一次，共計(jì)42天。
　　（4）來(lái)氟米特組：每日0.6mg/100g來(lái)氟米特灌胃，從造模后第10天開始治療。
　　（5）來(lái)氟米特+穴位埋線組：同時(shí)進(jìn)行穴位埋線及來(lái)氟米特灌胃操作。

5、>　　3.觀測(cè)指標(biāo)：血清指標(biāo)：采用 ELISA法檢測(cè)大鼠血清 IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、TGF-β1的含量。病理指標(biāo)：按炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、巨噬A型細(xì)胞增生、滑膜增生、纖維組織增生，4個(gè)方面病理改變進(jìn)行評(píng)價(jià)計(jì)分。
　　4.統(tǒng)計(jì)方法：所得數(shù)據(jù)以(x±s)表示，采用 spssV15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，方差分析，組間采用F檢驗(yàn)后繼以q檢驗(yàn)。
　　5.結(jié)果：本研究發(fā)-現(xiàn)，穴位埋線能夠有效的降低佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清

6、中IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α的含量，升高TGF-β1的水平，從兩方面糾正Th17/Treg的失衡，同時(shí)防止炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，巨噬A型細(xì)胞、滑膜及纖維組織的增生，改善佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織病理形態(tài)，從而達(dá)到減輕病情活動(dòng)，阻止病情發(fā)展，防止關(guān)節(jié)出現(xiàn)不可逆的破壞。穴位埋線在降低Th17細(xì)胞水平方面效果不亞于現(xiàn)有治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一線用藥來(lái)氟米特，且在升高Treg細(xì)胞水平方面更優(yōu)于來(lái)氟米特，聯(lián)合應(yīng)用穴位埋線及來(lái)氟米特效果更佳。

7、
　　6.結(jié)論：①SD大鼠IFA模型血清中Th17細(xì)胞表達(dá)明顯高于正常大鼠，而Treg細(xì)胞水平則較正常大鼠有明顯降低，說明 Th17/Treg細(xì)胞的相關(guān)細(xì)胞因子的平衡確實(shí)與RA病情相關(guān)；
　　②穴位埋線能夠有效的降低佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α的含量，升高TGF-β1的水平，抑制Th17細(xì)胞及上調(diào)Treg細(xì)胞，糾正Th17/Treg的失衡，通過升高TGF-β1的水平促Treg細(xì)胞的表達(dá)，

8、同時(shí)抑制抑制Th17細(xì)胞的分化以及Th17細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α等的表達(dá)，防止炎癥細(xì)胞及粘附分子在病變部位聚集、炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)、血管翳的增生以及關(guān)節(jié)軟骨的破壞，從而達(dá)到治療RA的目的。其可能的作用機(jī)制是通過上調(diào) Foxp3的水平，內(nèi)源性 TGF-β與炎癥介質(zhì)IL-6誘導(dǎo)RORγt表達(dá)促使Th0細(xì)胞分化為Thl7細(xì)胞的過程被抑制,而后隨著炎癥介質(zhì)如 IL-6含量的減少,RORγt的功能被 Foxp3所抑制，

9、同時(shí)促進(jìn)Th0細(xì)胞向Treg細(xì)胞的分化,維持Treg的功能的同時(shí)使Th17 細(xì)胞的IL-21、IL-17的表達(dá)和分泌降低，抑制IL-6，TNF-α，IL-1β分泌和表達(dá)，具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究；
　?、垩ㄎ宦窬€治療可以有效緩解RA患者關(guān)節(jié)炎癥狀、延緩關(guān)節(jié)破壞，保護(hù)和維持關(guān)節(jié)功能。穴位埋線在降低Th17細(xì)胞水平方面效果不亞于現(xiàn)有治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一線用藥來(lái)氟米特，且在升高Treg細(xì)胞水平方面更優(yōu)于來(lái)氟米特，聯(lián)合應(yīng)用