黃連素對大鼠肝CYP3A4酶代謝的影響.pdf

1、藥物相互作用目前已成為藥物安全性評價(jià)的主要內(nèi)容。CYP3A4是人體CYP450酶系中最大的亞家族之一，廣泛參與臨床藥物的代謝。CYP3A4可被其他藥物和化合物誘導(dǎo)或抑制，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的不良反應(yīng)和藥物相互作用。黃連素廣泛存在于多種中藥材、食物和蔬菜中，在體外和體內(nèi)對人及動(dòng)物肝CYP450酶系有誘導(dǎo)或者抑制作用。隨著黃連素及其制劑在日常生活中廣泛的應(yīng)用，其與CYP3A4相互作用的問題也日益突出。
　　目的:
　　本研究采用體內(nèi)和

2、體外實(shí)驗(yàn)的方法，研究黃連素通過對大鼠肝CYP3A4的作用，并闡明黃連素對咪達(dá)唑侖在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響及其機(jī)制，為臨床合理用藥及藥物相互作用研究提供依據(jù)。
　　方法:
　　1黃連素對大鼠肝CYP3A4抑制常數(shù)(Ki)的測定采用鈣沉淀法制備空白大鼠肝微粒體，在大鼠肝微粒體中加入咪達(dá)唑侖、磷酸鉀緩沖液、肝微粒體蛋白混懸液，預(yù)孵育后加入NADPH啟動(dòng)反應(yīng)，孵育后加入冰乙腈終止反應(yīng)，渦旋、離心，取上清液進(jìn)行分析測定咪達(dá)唑侖濃度。以咪

3、達(dá)唑侖在大鼠肝微粒體中的轉(zhuǎn)化率作為酶活性指標(biāo)。在上述孵育體系中，測定不同濃度黃連素對咪達(dá)唑侖轉(zhuǎn)化率的影響，計(jì)算黃連素對CYP3A4活性的抑制常數(shù)。
　　2不同劑量及不同作用時(shí)間黃連素對大鼠肝CYP3A4的影響分別以低劑量(75mg·kg-1·d-1)、中劑量組(150mg·kg-1·d-1)和高劑量組(300mg·kg-1·d-1)的黃連素，給予大鼠連續(xù)灌胃8d，制備肝微粒體，以咪達(dá)唑侖在大鼠肝微粒體中的轉(zhuǎn)化率作為酶活性指標(biāo)，考察

4、不同劑量黃連素對大鼠肝CYP3A4影響。
　　以150mg·kg-1·d-1的黃連素，分別給予大鼠連續(xù)灌胃4d、8d和12d，制備肝微粒體，以咪達(dá)唑侖在大鼠肝微粒體中的轉(zhuǎn)化率作為酶活性指標(biāo)，考察不同作用時(shí)間黃連素對大鼠肝CYP3A4影響。
　　3黃連素對大鼠體內(nèi)肝CYP3A4的影響12只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對照組(n=6)和試驗(yàn)組(n=6)，對照組連續(xù)灌胃生理鹽水8d，試驗(yàn)組連續(xù)灌胃150mg·kg-1·d-1黃連素8

5、d后，兩組均于末次灌胃后即刻，靜脈推注10mg·kg-1咪達(dá)唑侖注射液，并于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)眼眶內(nèi)眥采血0.5ml，離心后應(yīng)用高效液相色譜法(HPLC)測定大鼠血漿中咪達(dá)唑侖的濃度。數(shù)據(jù)采用DAS2.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)算咪達(dá)唑侖藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，其中峰濃度(Cmax)為實(shí)測值，考察黃連素對咪達(dá)唑侖藥動(dòng)學(xué)的影響。
　　結(jié)果:
　　1 黃連素對大鼠肝CYP3A4抑制常數(shù)(Ki)的測定大鼠肝CYP3A4代謝咪達(dá)唑侖的Km為28.6

6、7μM，Vmax為3.06nmol·min-1·mg protein-1，內(nèi)在清除率CLint為0.11ml·min-1·mg-1。黃連素競爭性抑制大鼠肝微粒體CYP3A4對咪達(dá)唑侖的代謝，其抑制常數(shù)K1為116.4μM。
　　2 不同劑量及不同作用時(shí)間黃連素對大鼠肝CYP3A4的影響黃連素低劑量組與對照組無顯著性差異，黃連素中劑量組和高劑量組可顯著抑制大鼠肝CYP3A4的活性，降低咪達(dá)唑侖在體外的代謝，Km分別28.66±7.8

7、9、28.88±8.11、30.99±7.78和36.37±8.22μM;Vmax分別為3.96±0.30、3.05±0.30、2.89±0.26和2.54±0.82nmol·min-1·mg protein-1;CLint分別為138.17±5.29、105.61±3.65、93.26±1.47和69.84±1.08ml·min-1·mg-1。
　　黃連素連續(xù)灌胃4d組與對照組無顯著性差異，連續(xù)灌胃8d組和12d組，黃連素可顯著

8、抑制大鼠肝CYP3A4的活性，降低咪達(dá)唑侖在體外的代謝，Km分別28.77±7.88、29.56±8.04、30.93±7.75和36.24±8.23μM;Vmax分別為3.06±0.29、3.08±0.31、2.89±0.86、和2.56±0.24nmol·min-1·mg protein-1;CLint分別為106.36±10.54、104.19±6.71、93.44±3.19和70.64±2.48ml·min-1·mg-1。

9、>　　3 黃連素對大鼠體內(nèi)肝CYP3A4的影響單用咪達(dá)唑侖組和咪達(dá)唑侖合用黃連素組，主要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax分別為6.53±0.58和8.82±1.05μg·m1-1，T1/2分別30.00±8.75和27.42±5.08min，Vd分別為2.85±1.35和1.92±0.43L·kg-1，CL分別為4.03±1.24和2.98±0.76L·h-1·kg-1，AUC0-∞分別為2.81±1.11和3.59±0.95mg·h·L-1。