轉(zhuǎn)錄因子FOXK2在腎透明細胞癌中的表達及功能機制研究.pdf

1、目的：FOXK2是Forkhead box轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)FOXK2廣泛參與多種生物學(xué)過程，并且在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著至關(guān)重要的角色。目前已經(jīng)陸續(xù)有FOXK2在乳腺癌及結(jié)腸癌中的研究報道。然而，F(xiàn)OXK2在腎透明細胞癌中的生物學(xué)功能尚不清楚。本實驗主要研究FOXK2在腎透明細胞癌中的表達情況，同時結(jié)合臨床病理資料及隨訪結(jié)果，研究其對腎透明細胞癌患者預(yù)后的影響。同時通過一系列體外及體內(nèi)實驗，對其在腎透明細胞癌中發(fā)

2、揮的生物學(xué)功能進行研究，另外，利用基因芯片檢測篩選出潛在的下游靶基因并進行驗證。
　　方法：①通過實時定量PCR、Western-Blot及免疫組化檢測42例腎透明細胞癌及配對癌旁正常腎組織標本中FOXK2的mRNA以及蛋白的表達水平。將定量檢測結(jié)果結(jié)合臨床資料，進一步闡明FOXK2的表達水平對腎透明細胞癌患者預(yù)后的影響。②分別在786-O及769-P細胞中敲低和過表達FOXK2，進一步在體外研究FOXK2對腎癌細胞惡性表型的影響

3、。③通過流式細胞儀檢測敲低及過表達FOXK2后786-O及769-P細胞周期及凋亡的變化。④構(gòu)建穩(wěn)定表達FOXK2的裸鼠皮下移植瘤模型，檢測FOXK2在體內(nèi)對腎透明細胞癌生長的影響。⑤通過Affymetrix GeneChip(@)Human Transcriptome Array2.0對過表達FOXK2的769-P細胞進行表達譜芯片檢測，通過分析篩選潛在的下游靶基因并進行初步驗證。
　　結(jié)果：①與對應(yīng)的癌旁正常腎組織相比，F(xiàn)OX

4、K2的mRNA和蛋白表達水平在腎透明細胞癌組織標本中顯著的降低(p＜0.01)。并且在相對較晚的臨床T分期、較長腫瘤直徑以及較高Fuhrman分級的患者中FOXK2的mRNA呈現(xiàn)相對較低的表達水平。Kaplan-Meier生存分析顯示FOXK2mRNA低表達組的DFS較高表達組更差。Cox風(fēng)險回歸分析顯示低表達的FOXK2mRNA是腎透明細胞癌患者預(yù)后不良的獨立危險因素(HR=4.115，p=0.034)。②在4種腎透明細胞癌細胞株中，

5、FOXK2的表達水平均低于在正常腎小管上皮細胞株中的表達，并且在786-O中表達相對較高，在769-P中表達相對較低;769-P腎癌細胞的增殖、克隆形成、侵襲、遷移以及運動能力在過表達FOXK2后受到了顯著抑制;而敲低FOXK2后，786-O細胞的上述能力得到顯著增強。③在769-P及786-O細胞中過表達FOXK2后可以顯著的增加細胞的凋亡比例，使Bcl-2以及Caspase-3的表達水平降低，同時使cleaved Caspase-3

6、的表達水平升高。④裸鼠成瘤實驗進一步證實，F(xiàn)OXK2在體內(nèi)可以通過誘導(dǎo)凋亡進而抑制腎透明細胞癌的生長增殖。⑤通過對過表達FOXK2的769-P細胞進行表達譜芯片檢測及分析后發(fā)現(xiàn)，EGFR是FOXK2的潛在下游靶基因，并且FOXK2可能通過抑制EGFR進而發(fā)揮腫瘤抑制的作用。
　　結(jié)論：FOXK2在腎透明細胞癌中呈低表達，其表達水平降低是預(yù)后不良的獨立危險因素。FOXK2在體外及體內(nèi)可以通過誘導(dǎo)凋亡進而抑制腎透明細胞癌細胞的惡性表型