TGF-β1通過ERK1-2信號通路促進人肝星狀細(xì)胞LX-2中HMGA1基因的表達(dá).pdf

1、目的：
　　明確TGF-β1是否誘導(dǎo)了人肝星狀細(xì)胞LX-2中HMGA1基因的表達(dá)，是否活化ERK1/2和Akt信號通路，TGF-β1是否通過ERK1/2和（或）Akt通路促進HMGA1基因的表達(dá)。
　　方法：
　　1、以體外培養(yǎng)的LX-2作為研究對象，經(jīng)血清饑餓處理后，加入終濃度分別為0ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的TGF-β1孵育，24小時后收集細(xì)胞，提取LX-2細(xì)胞的總RNA，用Realt

2、ime-qPCR法檢測各組細(xì)胞中HMGA1和HMGA2的mRNA表達(dá)情況。
　　2、以5ng/ml的TGF-β1及ERK1/2和Akt通路抑制劑（分別為PD98059和MK2206）處理LX-2細(xì)胞，設(shè)正常對照組、TGF-β1刺激組、TGF-β1+DMSO陰性對照組、TGF-β1+PD98059（MK2206）處理組，采用western blot檢測各組細(xì)胞中pERK1/2、pAkt、ERK1/2、Akt的蛋白表達(dá)情況。
　

3、　3、用5ng/ml的TGF-β1及PD98059和MK2206處理LX-2細(xì)胞，設(shè)正常對照組、TGF-β1刺激組、TGF-β1+DMSO陰性對照組、TGF-β1+MK2206處理組、TGF-β1+PD98059處理組，采用Realtime-qPCR和western blot檢測各組細(xì)胞中HMGA1的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、隨著TGF-β1劑量加大，HMGA1和HMGA2的mRNA表達(dá)水平逐漸升高，并在

4、濃度為5ng/ml時達(dá)最高水平(P﹤0.05)。
　　2、在LX-2細(xì)胞中TGF-β1顯著促進了ERK1/2和Akt的磷酸化水平(P﹤0.05)。
　　3、TGF-β1顯著增加了HMGA1的蛋白和mRNA表達(dá)水平(P﹤0.05)，并且PD98059能有效阻斷TGF-β1對HMGA1的誘導(dǎo)作用(P﹤0.05)，而MK2206對HMGA1表達(dá)無明顯影響。
　　結(jié)論：
　　1、TGF-β1可以顯著誘導(dǎo)人肝星狀細(xì)胞LX-