大鼠肝再生中PLCG2通過NF-κB和ERK信號通路促進肝細胞增殖.pdf

1、磷脂酶C(Phospholipase C，PLC)是普遍存在于真核生物中的一種酶，由一組功能相似的蛋白組成，包括PLCγ1和PLCγ2等。PLCγ2(PLCG2)在細胞增殪，凋亡以及腫瘤發(fā)育調(diào)控中發(fā)揮重要作用，但其調(diào)控肝再生的作用機制尚不清楚。為研究PLCG2在大鼠肝再生中對細胞增殖的作用，我們首先通過Rat Genome2302.0基因微陣列分析PLCG2在大鼠肝再生中的基因表達譜，根據(jù)GO和NCBI網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫查找細胞增殖相關(guān)基因，進

2、而根據(jù)QIAGEN和KEGG網(wǎng)站以及IPA軟件分析獲得PLCG2參與的細胞增殖相關(guān)信號通路和相關(guān)基因，并運用譜函數(shù)Et計算基因間的協(xié)同作用。最后通過網(wǎng)絡(luò)分析來進一步解析PLCG2調(diào)控大鼠肝再生中肝細胞增殖的途徑和方式。結(jié)果表明，大鼠基因組芯片中606個大鼠肝再生關(guān)鍵基因參與細胞增殖信號通路。譜函數(shù)（Et值）和IPA軟件分析表明血小板源性生長因子(PDGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、胰島素(INS)、抑瘤素M(OSM)、白介素2(I

3、L2)、組蛋白H3受體(HRH3)等信號分子介導(dǎo)的信號通路與肝臟細胞的增殖活動密切相關(guān)，并且PLCG2是這些信號通路的匯集點，推測其可能在大鼠肝再生中對肝細胞的增殖有重要的調(diào)控作用。
　　近年來，通過小RNA干涉(RNAi)來抑制基因的表達已經(jīng)越來越多地被用于基因功能研究。為進一步探討PLCG2在大鼠肝再生中對細胞增殖的調(diào)節(jié)作用，本文選用正常大鼠肝細胞株BRL-3A為研究模型，通過RNAi的方法干涉PLCG2在BRL-3A細胞中的

4、表達，檢測PLCG2信號通路及其所調(diào)控的下游增殖相關(guān)基因/蛋白的表達變化，解析PLCG2調(diào)節(jié)BRL-3A細胞增殖的可能作用機制。
　　首先，設(shè)計與合成PLCG2的siRNA，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染BRL-3A細胞，于轉(zhuǎn)染后48h，MTT法檢測轉(zhuǎn)染后的細胞活力變化情況，BrdU免疫熒光標記法檢測轉(zhuǎn)染siRNA后對細胞的增殖作用影響，流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞周期變化，qRT-PCR和Western Blot分別檢測PLCG2及其通路以及下游

5、增殖相關(guān)基因/蛋白的表達變化。結(jié)果表明，將PLCG2 siRNA轉(zhuǎn)染BRL-3A細胞48h后檢測發(fā)現(xiàn)，與陰性對照組相比PLCG2 siRNA轉(zhuǎn)染組的細胞活力明顯低于陰性對照組(p＜0.01)。BrdU陽性細胞數(shù)也明顯降低且差異顯著(p＜0.05)，流式細胞術(shù)結(jié)果顯示S+G2期細胞亦明顯減少(p＜0.05)。檢測PLCG2相關(guān)信號通路基因及其下游增殖相關(guān)基因的mRNA含量變化，發(fā)現(xiàn)NF-κB和ERK信號通路相關(guān)基因NF-κB2，F(xiàn)OS，J