瘦素促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖并通過(guò)ERK1-2通路上調(diào)VEGF表達(dá).pdf

1、目的: 研究瘦素、瘦素受體、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在肺癌組織和正常肺組織中的表達(dá)，結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行分析，探討瘦素、瘦素受體、VEGF的表達(dá)與肺癌生長(zhǎng)，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。并通過(guò)研究瘦素在體外對(duì)A549人肺腺癌細(xì)胞的增殖及VEGF表達(dá)的影響，探討瘦素在肺癌血管生成中的作用及其對(duì)VEGF的調(diào)控機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)40例人肺癌組織及40例正常肺組織中瘦素、瘦素受體、VEGF的表達(dá)情況，

2、分析三者在肺癌組織中的表達(dá)及其與肺癌病期、病理類型之間的關(guān)系。
　　 2.對(duì)A549人肺腺癌細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，采用四甲基偶氮唑鹽比色（MTT） 法檢測(cè)不同濃度瘦素對(duì)A549人肺腺癌細(xì)胞增殖影響；免疫細(xì)胞化學(xué)法瘦素對(duì)VEGF蛋白表達(dá)的影響；免疫印跡（western blot）法檢測(cè)瘦素對(duì)P-ERK1/2、VEGF蛋白表達(dá)的影響。
　　 3.用ERK1/2抑制劑PD98059預(yù)處理A549細(xì)胞后，再與160ng/ml瘦素共孵

3、育，采用western blot法檢測(cè)VEGF蛋白表達(dá)的變化，進(jìn)一步探索瘦素誘導(dǎo)VEGF蛋白表達(dá)增加的可能機(jī)制。
　　 結(jié)果:
　　 1.肺癌及正常肺組織瘦素的陽(yáng)性表達(dá)率分別為83.5％、31.2％，瘦素受體的陽(yáng)性表達(dá)率分別為67.5％、37.5％，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。瘦素及瘦素受體的表達(dá)在不同性別、年齡、腫物大小、病理類型等組間比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。瘦素及瘦素受體表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

4、比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率高，在III+IV期組表達(dá)較I+II期組高，差異有顯著性(P<0.05)。VEGF在肺癌及正常肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為80％、12.5％，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。VEGF的表達(dá)在不同性別、年齡、腫物大小、病理類型等組間比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。VEGF在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，在III+IV期組表達(dá)亦較I+II期組高(P<0.05)。
　　 2.MTT法檢測(cè)結(jié)

5、果：在一定范圍內(nèi)，瘦素呈時(shí)間、劑量依賴性促進(jìn)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)(P<0.05)。當(dāng)瘦素濃度為40 ng/ml ，80ng/ml，160 ng/ml時(shí)，在24h至48h，對(duì)A549的增殖率呈上升趨勢(shì)，而到72h其增殖率反而下降，且瘦素在320ng/ml濃度時(shí)其增殖率并未上升，其機(jī)制可能與藥物的受體飽和度有關(guān)。
　　 3.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果：A549細(xì)胞中瘦素、瘦素受體、VEGF均有陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性著色均以細(xì)胞漿為主，呈棕黃色。陰性對(duì)照

6、組、瘦素80ng/ml、160ng/ml組中，VEGF 的染色灰度值分別為115.33±7.26、133.54±10.22、150.65±9.39，隨著瘦素濃度的增加VEGF染色強(qiáng)度逐漸增高，與陰性對(duì)照組相比有顯著差異(P<0.05)。
　　 4.western-blot結(jié)果顯示：隨著瘦素濃度的增加P-ERK1/2、VEGF 蛋白表達(dá)水平逐漸增高，與陰性對(duì)照組相比有顯著差異(P<0.05)。應(yīng)用ERK1/2抑制劑PD98059預(yù)

7、處理A549細(xì)胞后，再與160ng/ml瘦素共孵育，A549細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比明顯降低( P < 0.05）。
　　 5.相關(guān)性分析結(jié)果：瘦素與瘦素受體表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)，瘦素和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.675, P <0.05）；在瘦素80ng/ml、160ng/ml濃度組中，P-ERK1/2染色灰度比值分別為0.543±0.042、0.759±0.039；VEGF染色灰度比值分別為0.654±0.024、

8、0.862±0.094；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明P-ERK1/2和VEGF染色灰度比值之間具有明顯相關(guān)性 (r=0.694，P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.瘦素、瘦素受體、VEGF在肺癌組織中均高表達(dá)，且其表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，提示瘦素，瘦素受體與VEGF可能參與肺癌發(fā)生發(fā)展中的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程。
　　 2.A549細(xì)胞上有瘦素受體表達(dá)，與瘦素結(jié)合，上調(diào)VEGF的表達(dá)促進(jìn)肺癌血管生成并促進(jìn)A549