TGF-β1對(duì)人甲狀腺癌細(xì)胞HMGA1表達(dá)的影響及機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：探討TGF-β1對(duì)人甲狀腺癌SW579細(xì)胞中HMGA1表達(dá)的影響及其初步機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)人甲狀腺癌SW579細(xì)胞作為研究對(duì)象。（1）RT-PCR及實(shí)時(shí)定量PCR從核酸水平觀察TGF-β1對(duì)SW579細(xì)胞HMGA1表達(dá)的量效和時(shí)效影響。（2）免疫熒光及Western Blotting從蛋白水平分析TGF-β1對(duì)SW579細(xì)胞HMGA1表達(dá)的量效和時(shí)效影響。（3）雙熒光素酶檢測(cè)觀察TGF-β1對(duì)SW579細(xì)胞HMGA1

2、啟動(dòng)子活性量效和時(shí)效的影響。（4）RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR及免疫熒光等分別從核酸水平和蛋白水平探討 TGF-β1對(duì) HMGA1表達(dá)影響可能所涉及的信號(hào)通路。
　　結(jié)果：
　　1.RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫熒光及Western Blotting結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，不同濃度TGF-β1能上調(diào)甲狀腺癌SW579細(xì)胞中HMGA1的表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在濃度為5ng/ml時(shí)達(dá)最大上調(diào)作用。
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3、. RT-PCR結(jié)果顯示：TGF-β1在甲狀腺癌SW579細(xì)胞中作用8h及12h時(shí)能上調(diào)HMGA1的表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且在作用8h時(shí)已達(dá)最大上調(diào)作用。免疫熒光結(jié)果顯示：TGF-β1在甲狀腺癌SW579細(xì)胞中作用2h、4h、8h及12h時(shí)能上調(diào)HMGA1的表達(dá)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且在作用8h時(shí)達(dá)最大上調(diào)作用。3.成功提取出含有HMGA1啟動(dòng)子的質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染SW579細(xì)胞，用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)

4、結(jié)果顯示：不同濃度的TGF-β1均能激活HMGA1的啟動(dòng)子活性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且在濃度為5ng/ml時(shí)已達(dá)最大激活作用。TGF-β1在作用8h及12h時(shí)均能激活HMGA1的啟動(dòng)子活性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且在作用8h時(shí)達(dá)最大激活作用。
　　4.用PI3K-Akt和MEK-ErK信號(hào)通路相關(guān)抑制劑（Wortmannin、U0126、PD98059）處理SW579細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫熒

5、光、啟動(dòng)子活性測(cè)定等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：TGF-β1對(duì)甲狀腺癌SW579細(xì)胞HMGA1的表達(dá)有上調(diào)作用(P<0.05)，抑制劑（Wortmannin、U0126、PD98059）均能抑制TGF-β1的這種上調(diào)作用，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示PI3K-Akt和MEK-ErK信號(hào)通路可能參與了人甲狀腺癌細(xì)胞中TGF-β1對(duì)HMGA1表達(dá)的調(diào)控過(guò)程。
　　結(jié)論：
　　1. TGF-β1能上調(diào)甲狀腺癌SW579細(xì)胞中H