LncRNA-AV310809通過調控Wnt2-βcatenin信號通路促進TGF-β1誘導的腹膜間皮細胞上皮間質轉分化過程.pdf

1、目的：
　　通過前期lncRNA基因芯片篩選，我們尋找到了與腹膜纖維化相關的關鍵性長鏈非編碼 RNA（lncRNA-AV310809），共表達網絡分析預測其可能通過纖維化信號通路（Wnt2/β-catenin信號通路）發(fā)揮作用。本研究旨在進一步通過體外實驗探討該關鍵性lncRNA在腹膜纖維化過程中的作用及具體調控機制。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)腹膜間皮細胞系（HMrSV5），運用濃度為7ng/ml的轉化生長因子（T

2、GF-β1）刺激細胞48h，建立腹膜間皮細胞間質轉分化（EMT）模型。運用Western blot檢測纖維連接蛋白（FN）、I型膠原蛋白（COL-I）、E鈣黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達變化；運用實時定量PCR驗證 lncRNA-AV310809表達水平的改變；通過 Western blot觀察 TGF-β1對Wnt2/β-catenin信號通路的影響。2、運用TGF-β1刺激已轉染lncRNA-AV

3、310809過表達質?；蜿幮詫φ召|粒的HMrSV5細胞。用光鏡觀察HMrSV5細胞形態(tài)的變化；Western blot及免疫熒光檢測FN、COL-I、E-cadherin、α-SMA蛋白表達變化以及對Wnt2/β-catenin信號通路的影響。3、運用MTT及劃痕損傷實驗觀察lncRNA-AV310809對HMrSV5細胞增殖及遷移的影響。
　　結果：
　　1、TGF-β1可誘導HMrSV5細胞EMT發(fā)生，即上皮表型E-ca

4、dherin蛋白表達水平降低，而間質表型FN、COL-I及α-SMA蛋白表達水平升高；2、TGF-β1在誘導HMrSV5細胞發(fā)生EMT的同時上調了lncRNA-AV310809的表達水平（差異倍數1.30倍，P=0.02）；3、TGF-β1在誘導HMrSV5細胞發(fā)生EMT的過程中Wnt2/β-catenin信號通路被活化（Wnt2、β-catenin蛋白表達增加）；4、過表達lncRNA-AV310809可能通過 Wnt2/β-cate

5、nin信號通路作用于 TGF-β1誘導的HMrSV5細胞 EMT發(fā)生:○1過表達 lncRNA-AV310809促進了 TGF-β1誘導的HMrSV5細胞梭形樣形態(tài)改變；○2過表達lncRNA-AV310809促進了TGF-β1誘導的HMrSV5細胞E-cadherin蛋白表達減少，而FN、COL-I及α-SMA蛋白表達增加；○3過表達lncRNA-AV310809促進了TGF-β1誘導的HMrSV5細胞Wnt2、β-catenin蛋白