TTF-1、Pax-8與TSHR在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)和意義.pdf

1、目的：
　　近20年來，我國甲狀腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯增加趨勢，年均增長約6.2％。據(jù)《2012中國腫瘤登記年報(bào)》報(bào)道，在全國腫瘤登記地區(qū)中，甲狀腺癌的發(fā)病率占據(jù)第10位，為6.54/10萬；而在女性中占據(jù)第8位，達(dá)10.09/10萬；男女發(fā)病比為1：3.2。甲狀腺癌中90%以上的為分化型甲狀腺癌（DTC），而其中甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)是其中最為常見的病理類型[1]。目前對(duì)

2、于PTC的治療外科手術(shù)最為重要，內(nèi)分泌治療和放射性I131治療也非常關(guān)鍵。其中術(shù)后內(nèi)分泌治療對(duì)降低甲狀腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移也不容忽視。有研究表明TTF-1為分子量為38kd的DNA結(jié)合蛋白，屬于轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，在甲狀腺生長發(fā)育過程中起重要作用，因特異性蛋白的基因啟動(dòng)子或增強(qiáng)子區(qū)域有TTF-1的結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)甲狀腺特異性基因（如Tg、TPO、TSHR和NIS）的轉(zhuǎn)錄具有調(diào)控作用。Pax-8也屬于轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，該基因表達(dá)一種核蛋白，

3、調(diào)節(jié)甲狀腺濾泡細(xì)胞的生長、終末分化及甲狀腺特異基因的表達(dá)。細(xì)胞特異性基因的轉(zhuǎn)錄通常都依賴于一系列的細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，如甲狀腺特異性轉(zhuǎn)錄因子1(Thyroid transcriptionfactor-1，TTF-1)和成框基因8編碼的轉(zhuǎn)錄因子(Paired—domaintranscription factor,Pax-8)等。TSHR是G蛋白偶聯(lián)受體超家庭中的一員，由αβ兩條多肽鏈亞基組成的大分子蛋白質(zhì)，其主要存在于甲狀腺濾泡細(xì)胞膜上

4、，是TSH主要的作用部位。相關(guān)研究表明TSHR的表達(dá)隨著甲狀腺組織的分化程度的降低而降低。TSH與細(xì)胞表面的TSHR結(jié)合后，與細(xì)胞表面的G蛋白的α亞基發(fā)生偶聯(lián)，通過G蛋白介導(dǎo)激活 cAMP（腺苷酸環(huán)化酶），從而使胞內(nèi)cAMP升高， cAMP進(jìn)一步激活 PKA（蛋白激酶 A），PKA活化后激活核內(nèi)的特異性轉(zhuǎn)錄因子，如TTF-1（甲狀腺特異性轉(zhuǎn)錄因子-1）、TTF-2（甲狀腺特異性轉(zhuǎn)錄因子-2）、Pax-8（成框基因8）或使其磷酸化，從而發(fā)

5、揮調(diào)節(jié)甲狀腺的功能，進(jìn)一步影響甲狀腺細(xì)胞表面特異性受體的表達(dá)，如TG、TPO、TSHR、NIS等。所以研究甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子可間接反映TSHR的數(shù)量及活性的表達(dá)。目前對(duì)于TSHR在甲狀腺癌的表達(dá)研究較多，結(jié)果不甚一致，對(duì)其轉(zhuǎn)錄因子的研究鮮有報(bào)到，而且TTF-1、Pax-8在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)定位及差異性仍存爭議。轉(zhuǎn)錄因子（TTF-1，Pax-8）與TSHR的關(guān)系研究國內(nèi)尚未涉及。本課題通過免疫組化SP法觀察甲狀腺乳頭狀腺癌（PTC）

6、組織及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫（NG）組織中TTF-1、Pax-8與TSHR的表達(dá)情況，并對(duì)TTF-1、Pax-8與TSHR的相關(guān)性進(jìn)行研究，為甲狀腺乳頭狀腺癌發(fā)生發(fā)展、診斷及治療療效提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)收集了河北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院東院區(qū)腺體外科自2014年08月至2016年07月外科手術(shù)切除的甲狀腺組織標(biāo)本98例，包括甲狀腺乳頭狀癌56例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫42例。所有甲狀腺癌患者術(shù)前均未經(jīng)過放，化療。分化型甲狀腺癌

7、按標(biāo)準(zhǔn)國際抗癌聯(lián)盟制定的TNM分期，分為I期38例，II期2例，III期11例，IV期5例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的18例。所有組織均取4μm厚度的連續(xù)切片7張，其中1張切片常規(guī)HE染色進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察，其余6張分別用于TTF-1、Pax-8及TSHR的免疫組織化學(xué)染色及陰性對(duì)照。采用SP法檢測TTF-1、Pax-8及 TSHR在甲狀腺乳頭狀癌及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件采用卡方

8、檢驗(yàn)，非參數(shù)秩合檢驗(yàn)和秩相關(guān)等統(tǒng)計(jì)方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1 TTF-1在甲狀腺組織中表達(dá)部位為細(xì)胞核。甲狀腺乳頭狀癌（PTC）、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫（NG）組織中的TTF-1陽性表達(dá)分別80.4%和95.2%，結(jié)節(jié)性甲狀腺中的陽性率高于甲狀腺乳頭狀癌，對(duì)TTF-1進(jìn)行Wilcoxon W檢驗(yàn)在兩者中的陽性及強(qiáng)陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-0.892， P=0.372，P>0.0

9、5）。I/II甲狀腺乳頭狀癌組比III/IV甲狀腺乳頭狀癌有更高的比例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明TTF-1的減少，臨床預(yù)后越差。此外我們還研究其在其他病理學(xué)參數(shù)，如淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、患者性別、年齡與TTF-1的關(guān)系，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不能認(rèn)為TTF-1的表達(dá)與這些因素有關(guān)。(見表1-6)
　　2 Pax-8在甲狀腺細(xì)胞的表達(dá)為細(xì)胞核和（或）細(xì)胞漿。在兩組病例中均有表達(dá)，但表達(dá)形式存在顯著差異：在PTC中主要為細(xì)胞核漿

10、共表達(dá)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-5.689，P=0.000，P<0.01）；在NG中主要表達(dá)于細(xì)胞核，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-6.256，P=0.000，P<0.01)。（見表7-9）
　　3 TSHR在甲狀腺腫細(xì)胞中主要表達(dá)細(xì)胞膜的基底側(cè)；此外甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的胞漿也有少量表達(dá)。但甲狀腺乳頭狀癌組織的著色強(qiáng)度小于結(jié)節(jié)性甲狀腺組織。在56例PTC組織中陽性率為83.9%，其中陽性和強(qiáng)陽性率為48.2%；42例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫

11、中陽性率為100%，陽性和強(qiáng)陽性率占85.7%；對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行Wilcoxon W檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以認(rèn)為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的TSH受體表達(dá)高于甲狀腺乳頭狀癌。TNM分期：Ⅰ/Ⅱ期陽性占比36/40，陽性表達(dá)率為90.0%；Ⅲ期/Ⅳ期陽性占比11/16，陽性表達(dá)率為68.8%。陽性表達(dá)率隨分期程度的增高，呈下降趨勢，運(yùn)用Wilcoxon W檢驗(yàn)，TSHR表達(dá)水平與臨床分析的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以認(rèn)為TSHR的表達(dá)水平越低，臨床預(yù)后越差。此

12、外，還對(duì)比了淋巴轉(zhuǎn)移，患者性別，腫瘤大小、年齡與TSHR的關(guān)系，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不能認(rèn)為TSH受體表達(dá)與這些因素有關(guān)。(見表10-15)
　　4對(duì)TTF-1與TSHR在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析， TTF-1的表達(dá)量變化與TSHR的表達(dá)變化呈正相關(guān)(r=0.520， P=0.000)，即在TTF-1在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)下降的時(shí)候，TSHR的表達(dá)亦隨之下降。在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫內(nèi)二者也存在正相關(guān)性（r=

13、0.649， P=0.000）。對(duì)Pax-8與TSHR在甲狀腺乳頭狀癌中胞核胞漿共表達(dá)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析P=0.069，按α=0.05水準(zhǔn)，P>0.05，尚不能認(rèn)為在甲狀腺乳頭狀癌中Pax-8與TSHR的表達(dá)具有相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1 TTF-l在甲狀腺良惡性病變組織中均可較好的表達(dá)，臨床可檢測TTF一1來正確判斷腫瘤的來源。
　　2 Pax-8在 PTC主要共表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，且具有良好的鑒別診