芯片非水電泳用于中藥有效成分的分離研究.pdf

1、非水毛細(xì)管電泳（Nonaqueous capillary electrophoresis,NACE）是近年來發(fā)展的新型分析技術(shù)，已被廣泛用于藥物、環(huán)境和生物分析等領(lǐng)域。與水相毛細(xì)管區(qū)帶電泳相比，具有選擇性高，分離效率高，管壁吸附作用弱，與多種檢測(cè)器兼容性好等優(yōu)點(diǎn)；尤其是當(dāng)分析對(duì)象為水中不穩(wěn)定的成分、不帶電荷的成分、難溶于水的物質(zhì)以及手性物質(zhì)時(shí)，NACE的優(yōu)點(diǎn)更加突出。
　　激光誘導(dǎo)熒光（Laserinducedfluorescen

2、ce, LIF）是目前最靈敏的檢測(cè)技術(shù)之一，具有靈敏度高、專屬性強(qiáng)、響應(yīng)速度快等優(yōu)點(diǎn)，是芯片電泳中最先采用的檢測(cè)技術(shù)之一，現(xiàn)在仍廣泛應(yīng)用。
　　本論文將非水毛細(xì)管電泳的功能集成到一個(gè)十幾平方厘米的玻璃芯片上，建立了Chip-NACE分離、LIF檢測(cè)中藥有效成分的新方法。論文四部分的主要內(nèi)容如下：
　　第一章綜述了非水毛細(xì)管電泳技術(shù)在理論和實(shí)際應(yīng)用方面的研究進(jìn)展。根據(jù)近年來NACE在分析領(lǐng)域的應(yīng)用，我們主要對(duì)NACE的理論研究

3、、優(yōu)勢(shì)、有機(jī)溶劑和背景電解質(zhì)的選擇、檢測(cè)方法、富集方式以及在中藥分析中的應(yīng)用等方面進(jìn)行了總結(jié)，并對(duì)其今后的發(fā)展進(jìn)行了展望。
　　第二章實(shí)驗(yàn)中，我們首次用Chip-NACE-LIF法測(cè)定了博落回籽藥材中血根堿和白屈菜紅堿的含量。實(shí)驗(yàn)條件為：
　?。?）電泳緩沖液：40 mmol·L-1乙酸銨-乙酸-50％甲酰胺(V/V)-水（pH*=2.90）；
　?。?）分離電壓：1.8 KV；
　?。?）進(jìn)樣時(shí)間：60 s；<

4、br>　?。?）檢測(cè)距離：4 cm。結(jié)果表明，完成一次血根堿和白屈菜紅堿的進(jìn)樣和基線分離只需120 s即可。血根堿在0.3-600μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9998），檢測(cè)限為2.0ng·mL-1；白屈菜紅堿在0.15-550μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9993），檢測(cè)限為5.0ng·mL-1。本文建立的方法簡(jiǎn)單、快速、樣品消耗量少，可用于測(cè)定博落回或白屈菜藥材中結(jié)構(gòu)及其相似的生物堿的含量。
　　第三章實(shí)驗(yàn)中，我

5、們首次用Chip-NACE-LIF法檢測(cè)了中藥大黃中蒽醌成分的含量，并對(duì)影響分離效率的重要參數(shù)（緩沖液濃度、pH值、分離電壓、水的比例等）進(jìn)行了系統(tǒng)地考察。最終得到的電泳優(yōu)化條件為：（1）電泳緩沖液：20 mmol·L-1乙酸銨-60%二甲亞砜-20%甲酰胺-20%水；（2）分離電壓：1.8 KV。完成一次電泳進(jìn)樣和分離過程的時(shí)間在150 s以內(nèi)。大黃素甲醚在1.44-28.43μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9995），檢測(cè)限為0

6、.085μg·mL-1；大黃酸在0.98-28.42μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9998），檢測(cè)限為0.077μg·mL-1。加標(biāo)回收率分別為101.4%（大黃酸）、97.8%（大黃素甲醚）。該方法簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，并成功應(yīng)用于大黃藥材中大黃素甲醚和大黃酸兩種成分的芯片電泳方法檢測(cè)，有望成為控制大黃藥材或其制劑中活性成分質(zhì)量的新方法。
　　第四章實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)于芯片制備電泳進(jìn)行了初步研究，旨在非水介質(zhì)分離的基礎(chǔ)上