芯片非水電泳用于中藥有效成分的分離研究.pdf

1、非水毛細管電泳（Nonaqueous capillary electrophoresis,NACE）是近年來發(fā)展的新型分析技術(shù)，已被廣泛用于藥物、環(huán)境和生物分析等領域。與水相毛細管區(qū)帶電泳相比，具有選擇性高，分離效率高，管壁吸附作用弱，與多種檢測器兼容性好等優(yōu)點；尤其是當分析對象為水中不穩(wěn)定的成分、不帶電荷的成分、難溶于水的物質(zhì)以及手性物質(zhì)時，NACE的優(yōu)點更加突出。
　　激光誘導熒光（Laserinducedfluorescen

2、ce, LIF）是目前最靈敏的檢測技術(shù)之一，具有靈敏度高、專屬性強、響應速度快等優(yōu)點，是芯片電泳中最先采用的檢測技術(shù)之一，現(xiàn)在仍廣泛應用。
　　本論文將非水毛細管電泳的功能集成到一個十幾平方厘米的玻璃芯片上，建立了Chip-NACE分離、LIF檢測中藥有效成分的新方法。論文四部分的主要內(nèi)容如下：
　　第一章綜述了非水毛細管電泳技術(shù)在理論和實際應用方面的研究進展。根據(jù)近年來NACE在分析領域的應用，我們主要對NACE的理論研究

3、、優(yōu)勢、有機溶劑和背景電解質(zhì)的選擇、檢測方法、富集方式以及在中藥分析中的應用等方面進行了總結(jié)，并對其今后的發(fā)展進行了展望。
　　第二章實驗中，我們首次用Chip-NACE-LIF法測定了博落回籽藥材中血根堿和白屈菜紅堿的含量。實驗條件為：
　　（1）電泳緩沖液：40 mmol·L-1乙酸銨-乙酸-50％甲酰胺(V/V)-水（pH*=2.90）；
　?。?）分離電壓：1.8 KV；
　?。?）進樣時間：60 s；<

4、br>　　（4）檢測距離：4 cm。結(jié)果表明，完成一次血根堿和白屈菜紅堿的進樣和基線分離只需120 s即可。血根堿在0.3-600μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9998），檢測限為2.0ng·mL-1；白屈菜紅堿在0.15-550μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9993），檢測限為5.0ng·mL-1。本文建立的方法簡單、快速、樣品消耗量少，可用于測定博落回或白屈菜藥材中結(jié)構(gòu)及其相似的生物堿的含量。
　　第三章實驗中，我

5、們首次用Chip-NACE-LIF法檢測了中藥大黃中蒽醌成分的含量，并對影響分離效率的重要參數(shù)（緩沖液濃度、pH值、分離電壓、水的比例等）進行了系統(tǒng)地考察。最終得到的電泳優(yōu)化條件為：（1）電泳緩沖液：20 mmol·L-1乙酸銨-60%二甲亞砜-20%甲酰胺-20%水；（2）分離電壓：1.8 KV。完成一次電泳進樣和分離過程的時間在150 s以內(nèi)。大黃素甲醚在1.44-28.43μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9995），檢測限為0

6、.085μg·mL-1；大黃酸在0.98-28.42μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性（r=0.9998），檢測限為0.077μg·mL-1。加標回收率分別為101.4%（大黃酸）、97.8%（大黃素甲醚）。該方法簡單、靈敏、準確、重現(xiàn)性好，并成功應用于大黃藥材中大黃素甲醚和大黃酸兩種成分的芯片電泳方法檢測，有望成為控制大黃藥材或其制劑中活性成分質(zhì)量的新方法。
　　第四章實驗中，我們對于芯片制備電泳進行了初步研究，旨在非水介質(zhì)分離的基礎上