靶向乳腺癌細胞的他莫昔芬納米粒的制備及體外初步評價.pdf

1、目的：
　　以殼聚糖（CS）為材料，合成染料木素修飾的殼聚糖衍生物（GEN-CS）；以GEN-CS為載體材料，TAM為模型藥物，三聚磷酸鈉（TPP）為交凝劑，染料木素（GEN）為靶向配基，采用離子交聯(lián)法構建靶向乳腺癌細胞的TAM納米粒，進一步評價納米粒的形態(tài)、粒徑、Zeta電勢、載藥量及包封率，體外釋放等；激光共聚焦顯微鏡觀察細胞對納米粒的攝取情況，采用MTT法比較載藥納米粒與游離藥物對MCF-7細胞的增殖抑制作用。
　　方

2、法：
　　利用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺（EDC/NHS）催化反應，將GEN與CS通過丁二酸的雙羧基進行偶聯(lián)，得到GEN-CS載體材料，運用紅外等技術對它的結構進行確證和表征。
　　GEN修飾的CS分子中未?；陌被c離子交凝劑TPP在適宜條件下形成納米粒，將TAM包載于納米粒中。用透射電子顯微鏡（TEM）觀察納米粒形態(tài)；用馬爾文ZS90粒度儀測其粒徑大小和分布、電勢；HPLC法測定納米粒

3、的載藥量和包封率；采用恒溫水浴振蕩法考察納米粒的體外釋藥。
　　制備FITC標記的他莫昔芬殼聚糖納米粒（TAM-CS-NPs）和TAM-GEN-CS-NPs，然后分別作用于 MCF-7細胞，用激光共聚焦顯微鏡觀察 TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs在細胞內的攝入與分布。
　　體外培養(yǎng) MCF-7細胞，通過 MTT法測定染料木素修飾的殼聚糖納米粒（GEN-CS-NPs）、TAM溶液、TAM-GEN-CS-NPs

4、納米粒懸液對細胞的增殖抑制率，并計算當細胞生長抑制率為50％時的所需藥物濃度，即IC50值。
　　結果：
　　制備的GEN-CS載體材料中GEN基團的質量百分含量為1.16%，GEN-CS和CS紅外譜圖對比發(fā)現(xiàn)，新增的1600 cm-1、1456 cm-1為苯環(huán)的特征吸收峰，1668 cm-1為酰胺I帶，這證實CS上成功接枝GEN。
　　透射電子顯微鏡（TEM）觀察納米粒為圓形或類圓形，平均粒徑為299.8 nm， P

5、DI為0.181，Zeta電位為27.6 mV，載藥量為14.02，包封率為85.77%，與TAM相比較，TAM-GEN-CS-NPs具有明顯的緩釋性能。
　　MCF-7細胞與經(jīng)FITC標記的TAM-CS-NPs和TAM-GEN-CS-NPs，共同孵育4 h（37℃），激光共聚焦顯微鏡觀察證明腫瘤細胞對TAM-GEN-CS-NPs的攝取明顯高于CS-NPs。
　　經(jīng)析因設計資料的方差分析，顯示藥物因素與濃度因素之間存在交互效

6、應（F=31.04，P=0.000），即不同處理組對腫瘤細胞的細胞增殖抑制率隨藥物濃度的變化而變化。GEN-CS-NPs對MCF-7細胞有輕微的增殖抑制作用，且隨著濃度的增加，抑制作用增強且具有顯著性差異（P<0.05）。TAM、TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞均有抑制作用，且隨著濃度的升高而增強；相同藥物的濃度，作用相同的時間， TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞增殖抑制作用最強，GEN-CS-NPs最弱，具有顯

7、著性差異（P<0.05）。TAM、TAM-GEN-CS-NPs的IC50分別為18.21μmol/L、12.82μmol/L。
　　結論：
　　以GEN-CS為載體，采用離子交聯(lián)法制備的TAM-GEN-CS-NPs形狀為類圓形或圓形、粒度分布均勻、具有較高載藥量和較好緩釋性能；激光共聚焦觀察結果初步顯示，TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞具有靶向性；MTT結果顯示TAM-GEN-CS-NPs對MCF-7細胞增殖抑制