淫羊藿對大鼠骨髓間充質干細胞的影響.pdf

1、目的：本文以Wistar大鼠為研究對象，自備淫羊藿含藥血清。觀察骨髓間充質干細胞在淫羊藿的干預下，骨髓間充質干細胞表達CD44、FN、PCNA和細胞增殖的情況。進而說明淫羊藿壯骨強筋的功效，為防止骨質疏松中藥藥物篩選提供參考。 實驗方法： (1)利用貼壁法培養(yǎng)骨髓間充質干細胞。細胞以1x10<'5>/ml接種于25cm<'2>培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)至瓶底長滿細胞，即可傳代。 (2)自備含藥血清：每只按4.4g/KG灌服(相

2、當于成人用量的20倍，約0.7克)，連續(xù)給藥一周，每日3次，末次給藥一小時后，無菌條件下，心臟取血6ml/只。離心15分鐘(2000r/min)，收集血清(10ml)，56℃補體滅活(嚴密觀察溫度波動)。 (3)將培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞分為三組：含藥血清組、地塞米松組、普通組。用含藥血清、地塞米松、普通血清對三組細胞進行干預。含藥血清組與地塞米松組的各組培養(yǎng)基中，加入10ml干預物；普通組加10ml牛血清。 (4)利用細

3、胞免疫組化法觀察細胞表達CD44、FN和PCNA的情況。 結果： (1)第2-5天的細胞計數(shù)表明了，含藥血清組和地塞米松的細胞增殖明顯。同時，第3天的細胞免疫組化看來，含藥血清組、地塞米松組和普通血清組的細胞均能表達PCNA。 (2)在第5、10、15、21天時，從鏡下觀察細胞免疫組化圖片來看，含藥血清組和地塞米松組都能表達PCNA、CD44及FN，說明含藥血清的誘導能力與地塞米松相同。 (3)淫羊藿有使