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文檔簡介
1、目的:探討高濃度全反式視黃酸(All-trans Retinoic Acid, at-RA)抑制大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,rBMSCs)向脂肪細胞分化的分子機制。
材料與方法:全骨髓法體外分離、培養(yǎng)rBMSCs;成脂誘導rBMSCs,并進行染色鑒定。在成脂誘導液中加入不同濃度(0.1~5.0μmol/L)的at-RA,分組為空白組(未加成脂誘導液)、
2、血清組(未加at-RA)、0.1、0.5、1.0、5.0μmol/L組,光學顯微鏡下動態(tài)觀察細胞形態(tài)變化,至誘導笫15天進行油紅O染色;并采用油紅O染色提取法分析不同濃度at-RA對rBMSCs成脂分化的影響;real-time PCR測定誘導結(jié)束(誘導第15天)及在1.0μmol/L at-RA作用不同時間后(誘導第0、1、3、5、及15天)細胞視黃酸受體(RARα、RARγ)、CCAAT增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)及過氧化物酶體
3、增殖激活受體γ2(PPARγ2)mRNA表達水平的變化。
結(jié)果:(1)rBMSCs的體外培養(yǎng)及成脂誘導:rBMSCs呈成纖維狀,排列為柵欄狀;體外可誘導分化為脂肪細胞。(2)細胞形態(tài)及油紅O染色觀察發(fā)現(xiàn):加入at-RA后,細胞內(nèi)脂滴出現(xiàn)時間延遲,脂滴大小及含脂滴細胞數(shù)均小于血清組,細胞成脂分化受到抑制,且呈濃度依賴性。(3)油紅O染色提取法半定量測定結(jié)果顯示,隨著at-RA濃度升高,分化細胞內(nèi)脂肪含量也隨著降低(P<0.0
4、1)。(4) real-time PCR檢測顯示:在誘導結(jié)束時,與血清組相比,加入at-RA后,rBMSCs的C/EBPα和PPARγ2表達顯著降低(P<0.05),RARα表達無顯著差異,但RARγ表達顯著增加;在1.0μmol/L at-RA作用不同時間后,從開始誘導到誘導的第5天,at-RA對C/EBPα和PPARγ2的表達影響并不明顯,而第15天時其抑制效果非常顯著(P<0.001);在誘導第15天時RARα表達情況與血清組相比
5、無明顯差異(血清組vs1.0μmol/L組:(x)±S=0.0084±0.0019 vs(x)±S=0.0091±0.0013,P>0.05),但RARγ表達明顯增強(血清組vs1.0μmol/L組:(x)±S=0.2259±0.0012 vs(x)±S=0.0531±0.0023,P<0.005)。
結(jié)論:(1)全骨髓培養(yǎng)法獲得了rBMSCs,且具有成脂分化功能。(2)0.1~5.0μmol/L at-RA可抑制rBMS
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