高濃度at-RA抑制大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的分子機(jī)制.pdf

1、目的：探討高濃度全反式視黃酸（All-trans Retinoic Acid, at-RA）抑制大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，rBMSCs)向脂肪細(xì)胞分化的分子機(jī)制。
　　 材料與方法：全骨髓法體外分離、培養(yǎng)rBMSCs;成脂誘導(dǎo)rBMSCs，并進(jìn)行染色鑒定。在成脂誘導(dǎo)液中加入不同濃度(0.1～5.0μmol/L)的at-RA，分組為空白組（未加成脂誘導(dǎo)液）、

2、血清組（未加at-RA）、0.1、0.5、1.0、5.0μmol/L組，光學(xué)顯微鏡下動態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài)變化，至誘導(dǎo)笫15天進(jìn)行油紅O染色;并采用油紅O染色提取法分析不同濃度at-RA對rBMSCs成脂分化的影響;real-time PCR測定誘導(dǎo)結(jié)束（誘導(dǎo)第15天）及在1.0μmol/L at-RA作用不同時(shí)間后（誘導(dǎo)第0、1、3、5、及15天）細(xì)胞視黃酸受體（RARα、RARγ）、CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)及過氧化物酶體

3、增殖激活受體γ2（PPARγ2）mRNA表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果：(1)rBMSCs的體外培養(yǎng)及成脂誘導(dǎo):rBMSCs呈成纖維狀，排列為柵欄狀;體外可誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞。(2)細(xì)胞形態(tài)及油紅O染色觀察發(fā)現(xiàn):加入at-RA后，細(xì)胞內(nèi)脂滴出現(xiàn)時(shí)間延遲，脂滴大小及含脂滴細(xì)胞數(shù)均小于血清組，細(xì)胞成脂分化受到抑制，且呈濃度依賴性。(3)油紅O染色提取法半定量測定結(jié)果顯示，隨著at-RA濃度升高，分化細(xì)胞內(nèi)脂肪含量也隨著降低(P＜0.0

4、1)。(4) real-time PCR檢測顯示:在誘導(dǎo)結(jié)束時(shí)，與血清組相比，加入at-RA后，rBMSCs的C/EBPα和PPARγ2表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，RARα表達(dá)無顯著差異，但RARγ表達(dá)顯著增加;在1.0μmol/L at-RA作用不同時(shí)間后，從開始誘導(dǎo)到誘導(dǎo)的第5天，at-RA對C/EBPα和PPARγ2的表達(dá)影響并不明顯，而第15天時(shí)其抑制效果非常顯著(P＜0.001);在誘導(dǎo)第15天時(shí)RARα表達(dá)情況與血清組相比

5、無明顯差異（血清組vs1.0μmol/L組:(x)±S=0.0084±0.0019 vs(x)±S=0.0091±0.0013，P＞0.05），但RARγ表達(dá)明顯增強(qiáng)(血清組vs1.0μmol/L組:(x)±S=0.2259±0.0012 vs(x)±S=0.0531±0.0023，P＜0.005)。
　　 結(jié)論：(1)全骨髓培養(yǎng)法獲得了rBMSCs，且具有成脂分化功能。(2)0.1～5.0μmol/L at-RA可抑制rBMS