激動內(nèi)向整流鉀通道對異丙腎誘發(fā)大鼠心律失常的抑制作用及機(jī)制.pdf

1、目的：
　　1.觀察內(nèi)向整流鉀通道激動劑扎考必利對異丙腎上腺素(ISO)誘發(fā)大鼠心律失常的抑制效應(yīng)及其電生理學(xué)機(jī)制。
　　2.觀察內(nèi)向整流鉀通道激動劑扎考必利對ISO誘發(fā)大鼠心肌肥厚模型心律失常的抑制效應(yīng)及其離子通道機(jī)制。
　　方法：
　　急性動物實(shí)驗(yàn)
　　1.制備異丙腎上腺素(ISO)誘發(fā)大鼠心律失常模型，麻醉狀態(tài)下監(jiān)測記錄心電圖變化。
　　實(shí)驗(yàn)分組：
　　(1)對照組：尾靜脈注射1 ml生理

2、鹽水(NS)；
　　(2)Zac組：尾靜脈注射扎考必利(15μg/kg)；
　　(3)ISO組：尾靜脈注射ISO(1280μg/kg)；
　　(4)ISO+Zac組：預(yù)先注射扎考必利(15μg/kg)，3 min后注射ISO(1280μg/kg)。
　　記錄藥物干預(yù)后1小時內(nèi)室性心律失常發(fā)生率、室性期前收縮個數(shù)、ST段下移幅度。
　　2.制備大鼠右心室乳頭肌標(biāo)本，微電極記錄細(xì)胞內(nèi)電位。
　　SD大鼠用

3、戊巴比妥鈉(40 mg/kg，ip)麻醉，開胸游離心臟，分離右室乳頭肌，用充灌3 mol/L KCl的玻璃微電極(10-20 M?)記錄乳頭肌細(xì)胞靜息膜電位以及動作電位。給予藥物干預(yù)后，各組均以5 Hz連續(xù)20次的串刺激作為條件刺激，觀測刺激后可能出現(xiàn)的延遲后除極(DADs)和觸發(fā)活動(TA)。
　　實(shí)驗(yàn)分組：
　　(1)對照組：Tyrode’s液灌流；
　　(2)ISO+CaCl2組：含1μmol/L ISO和3.6

4、 mmol/L CaCl2的Tyrode’s液灌流；
　　(3)ISO+CaCl2+Zac組：含1μmol/L ISO、3.6 mmol/L CaCl2和1μmol/L扎考必利的Tyrode’s液灌流；
　　(4)ISO+ CaCl2+ Zac+ BaCl2組：ISO+ CaCl2+ Zac組灌流液中再加入1μmol/LBaCl2。
　　慢性動物實(shí)驗(yàn)
　　3.制備異丙腎上腺素(ISO)誘發(fā)大鼠心肌肥厚的模型。

5、r>　　取健康SD大鼠(220-260 g)。將其隨機(jī)分成三組：
　　(1)對照組：每日給予0.5 ml的生理鹽水(NS)腹腔內(nèi)注射；
　　(2)ISO組：每日給予5 mg/kg的ISO腹腔內(nèi)注射；
　　(3)ISO+Zac組：每日給予5 mg/kg的ISO和15μg/kg的扎考必利腹腔內(nèi)注射。
　　連續(xù)給藥7天，制備大鼠心肌肥厚的模型。最后一次給藥24小時后靜脈麻醉，經(jīng)M型超聲心動圖檢查指標(biāo)評價心功能，體表心電

6、圖觀察1小時內(nèi)各組大鼠室性心律失常的發(fā)生率、ST段抬高發(fā)生率以及抬高幅度。
　　4.大鼠心室肌細(xì)胞急性分離(膠原酶法)。
　　細(xì)胞來自各模型組SD大鼠。戊巴比妥鈉(40 mg/kg，ip)麻醉，開胸游離心臟，修剪后經(jīng)主動脈逆行插管懸掛于Langendorff灌流裝置上，以100％氧氣充灌的無鈣Tyrode’s液恒壓(75cmH2O)、恒溫(37℃)灌流心臟8分鐘，改為酶液(含膠原酶P0.07-0.1 g/L)循環(huán)灌流15-2

7、0分鐘，待心臟變軟，變大，剪取心室肌組織置于KB液中剪碎，輕輕吹打5分鐘，過濾得到單個細(xì)胞，KB液中保存，室溫下讓其沉淀、靜置3小時。
　　5.全細(xì)胞膜片鉗記錄。
　　應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，電流鉗模式下記錄各組大鼠單個心室肌細(xì)胞靜息電位(RMP)和動作電位，施加條件刺激(3 Hz)誘發(fā)延遲后除極(DADs)；電壓鉗模式下記錄各組大鼠單個心室肌細(xì)胞L-型鈣電流(ICa-L)、內(nèi)向整流鉀電流(IK1)。
　　結(jié)果：

8、　　急性動物實(shí)驗(yàn)
　　1.ISO組大鼠出現(xiàn)頻發(fā)室性期前收縮及ST段下移；與之相比，ISO+Zac組大鼠室性心律失常的發(fā)生率從100%降至50%(n=6，P<0.05)，1小時內(nèi)室性期前收縮的個數(shù)從1574±521降至33±40(n=6，P<0.05)，而ST段下移幅度無明顯改善(n=6，P>0.05)。
　　2.扎考必利(1μmol/L)使正常大鼠右心室乳頭肌細(xì)胞靜息電位從(-74.42±1.95)mV增加至(-78.50±

9、2.07)mV(n=6，P<0.05)。
　　3.扎考必利(1μmol/L)可顯著抑制ISO合并高鈣誘發(fā)的大鼠右心室乳頭肌DADs和TA，使其發(fā)生率從93.75%降至25%(n=16，P<0.05)，且這一作用可被1μmol/L BaCl2反轉(zhuǎn)。
　　慢性動物實(shí)驗(yàn)
　　4.與對照組相比，ISO組左室收縮末期內(nèi)徑(left ventricular end-systolic dimension， LVESD)和左室舒張末期

10、內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic dimension，LVEDD)均顯著降低(n=6，P<0.05)，左室后壁舒張末期厚度(left ventricular posterior wall end-diastolic thickness， LVPWd)和室間隔舒張末期厚度(interventricular septum end-diastolic thickness，IVSd)以及左室射血分?jǐn)?shù)(left

11、ventricular ejection fraction，LVEF)和左室短軸縮短率(left ventricular fractional shortening，LVFS)增高(n=6，P<0.05)。提示ISO組大鼠室壁增厚，心室腔縮窄，呈現(xiàn)向心性心肌肥厚和收縮功能增強(qiáng)。ISO+Zac組大鼠與ISO組大鼠相比，所有形態(tài)學(xué)和心功能指標(biāo)均被部分逆轉(zhuǎn)，LVESD和LVEDD均增加，但與對照值仍有明顯差異(n=6，P<0.05)；LVPW

12、d、LVEF和LVFS均降低，且接近對照水平(見表2-1，圖2-1)。表明扎考必利對心室形態(tài)學(xué)重構(gòu)亦有一定程度的改善作用。
　　5.與對照組相比，ISO組大鼠出現(xiàn)頻發(fā)室性期前收縮及ST段抬高。與ISO組相比，ISO+Zac組大鼠室性心律失常的發(fā)生率從85.71%降至14.29%(n=7，P<0.05)，而ST段抬高幅度無明顯改善(n=7，P>0.05)。
　　6.與對照相比， ISO組大鼠單個心室肌細(xì)胞靜息電位由(-71.7

13、±1.8)mV降低至(-69.8±1.8)mV(n=10， P<0.05)；而 ISO+Zac組比對照組和 ISO組均明顯增加(-74.5±1.4)mV(n=10，P<0.05)。
　　7.在3Hz頻率刺激下，對照組單個心室肌細(xì)胞DADs發(fā)生率為2/14，ISO組增加至12/14(n=14，P<0.05)，ISO+Zac組僅為1/14，降低至對照組水平(n=14，P>0.05)。
　　8.Zac拮抗ISO誘發(fā)的ICa-L增大

14、各組ICa-L峰值電壓均在0 mV，其中ISO組ICa-L的電流密度(pA/pF)為-16.6±1.4，明顯大于對照值(-11.5±1.1)(n=6，P<0.05)，而ISO+Zac組為-11.3±0.5，與對照值幾乎相同(n=6，P>0.05)(圖2-6、2-7)。表明扎考必利可拮抗ISO對心肌ICa-L的增強(qiáng)作用。
　　9.Zac增大ISO組模型動物心肌IK1電壓鉗模式下，ISO組細(xì)胞在-100 mV和-60 mV時IK1電流

15、密度(pA/pF)分別為-24.4±3.0和2.4±0.4，與對照值-22.6±3.0和2.3±0.8相應(yīng)對比均無顯著差異(n=6，P>0.05)，但I(xiàn)SO+Zac組IK1的電流密度在-100 mV和-60 mV時分別達(dá)到-33.1±5.5和3.6±1.2，無論內(nèi)向或外向電流均明顯大于對照組(n=6， P<0.05)(圖2-8、2-9)?？梢奍SO的存在并不妨礙扎考必利對心肌IK1的增強(qiáng)作用。
　　結(jié)論：
　　選擇性IK1通