丙泊酚對(duì)匹魯卡品誘發(fā)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)的抑制作用及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：丙泊酚對(duì)匹魯卡品誘發(fā)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)的治療作用
　　 目的:建立可逆性膽堿酯酶抑制劑匹魯卡品誘發(fā)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status Epilepticus，SE)模型，觀察不同劑量靜脈麻醉藥丙泊酚在癲癇發(fā)作后30 min給藥對(duì)大鼠SE的影響。
　　 方法:在大鼠上建立氯化鋰(3mmol/kg)-匹魯卡品(30mg/kg)誘發(fā)SE模型，以行為學(xué)、腦電圖(electroencephalogram，EEG)上典型癲癇波的

2、變化、動(dòng)物24h存活數(shù)及皮層和海馬的病理變化為觀察指標(biāo)，評(píng)價(jià)比較不同劑量(mg/kg)丙泊酚(12.5、25、50、75及100)，安定(10)、東莨菪堿(10)及MK-801(2)對(duì)SE的抑制作用。
　　 結(jié)果:1.氯化鋰(3mmol/kg)-匹魯卡品(30mg/kg)可誘發(fā)SE，給予匹魯卡品后15min，動(dòng)物開(kāi)始出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、呆滯，面部抽搐、點(diǎn)頭樣運(yùn)動(dòng)、尾巴僵直并翹尾，20-25min后開(kāi)始出現(xiàn)四肢強(qiáng)直性抽搐，最后發(fā)展成為以

3、持續(xù)性全身性強(qiáng)直發(fā)作為特征的SE，在EEG上可觀察到SE所特有的、持續(xù)的高幅高頻驚厥波。2.行為學(xué)及EEG結(jié)果顯示，丙泊酚(50～100)mg/kg對(duì)SE具確切治療效果，并可顯著降低SE動(dòng)物死亡數(shù)(P<0.05)。3.SE出現(xiàn)后30min i.p.東莨菪堿(10mg/kg)、MK-801(2mg/kg)及安定(10mg/kg)，除東莨菪堿外，MK-801及安定對(duì)SE亦有較為明顯抑制作用，其抗驚效果與丙泊酚中、高劑量組相當(dāng)。4.HE染色結(jié)

4、果顯示，SE反復(fù)發(fā)作24h后皮層和海馬CA1區(qū)細(xì)胞數(shù)明顯減少，有的細(xì)胞腫脹破裂，輪廓模糊界限不清，排列紊亂，而海馬其它各區(qū)變化不甚明顯。丙泊酚組、DZP組和MK-801組細(xì)胞數(shù)較SE組明顯增多( P<0.05)。
　　 結(jié)論1.氯化鋰(3mmol/kg)-匹魯卡品(30mg/kg)可誘發(fā)典型的SE狀態(tài)，SE發(fā)作后24h皮層和海馬可見(jiàn)明顯的細(xì)胞損傷。2.丙泊酚對(duì)氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)的SE具有確切的治療效果，可明顯改善EEG變化，增

5、加出現(xiàn)SE動(dòng)物24 h存活數(shù)，改善皮層和海馬細(xì)胞的損傷程度，提示丙泊酚在SE治療上具潛在應(yīng)用價(jià)值。
　　 第二部分：丙泊酚對(duì)致死劑量NMDA中毒小鼠的保護(hù)作用
　　 目的：建立N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)致死模型，觀察丙泊酚對(duì)致死劑量NMDA中毒小鼠的保護(hù)作用。
　　 方法：給予致死劑量NMDA前10min，腹腔注射不同劑量(mg/kg)丙泊酚12.5、25、50、

6、75及100，NMDA受體拮抗劑MK-801(2 mg/kg)及等容積脂肪乳(丙泊酚溶劑)，以中毒動(dòng)物存活率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，觀察上述藥物對(duì)致死劑量NMDA中毒小鼠的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果：腹腔注射NMDA175mg/kg可導(dǎo)致小鼠全身驚厥發(fā)作及快速死亡；丙泊酚(12.5，25，50，75及100mg/kg)可劑量依賴性抑制NMDA致死效應(yīng)，顯著降低中毒小鼠死亡率；其作用類似于NMDA受體拮抗劑MK801(存活率100％)；而脂肪乳對(duì)

7、致死劑量NMDA中毒小鼠無(wú)保護(hù)作用。
　　 結(jié)論：丙泊酚(12.5～100)mg/kg可劑量依賴性的對(duì)抗NMDA誘發(fā)的致死效應(yīng)；丙泊酚可能存在對(duì)NMDA受體的直接或間接拮抗作用。
　　 第三部分：丙泊酚對(duì)匹魯卡品誘發(fā)SE大鼠皮層和海馬NMDA受體亞型表達(dá)的影響
　　 目的:在大鼠上建立可逆性膽堿酯酶抑制劑匹魯卡品誘發(fā)SE模型，觀察丙泊酚對(duì)SE大鼠皮層和海馬NMDA受體亞型(2A，2B)表達(dá)的影響。
　　

8、方法:60只SD大鼠隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組(BLK組)、SE組(SE組)、丙泊酚50mg/kg組(PPF組)、安定10mg/kg組(DZP組)、東莨菪堿10mg/kg組(SCOP組)及MK-801(2mg/kg)組(MK-801組).除BLK組外，其他各組大鼠均給予氯化鋰(3mmol/kg)及匹魯卡品(30mg/kg)，建立匹魯卡品誘發(fā)SE模型。待SE出現(xiàn)后30min，各治療組動(dòng)物分別腹腔注射丙泊酚等治療藥物及等容量生理鹽水(B

9、LK組和SE組)。24 h后，將存活動(dòng)物分兩批處理，每組取3只大鼠進(jìn)行心臟灌注后取大腦行免疫組化分析；剩余大鼠(每組取4只)斷頭取腦，快速剝離皮層和海馬進(jìn)行蛋白免疫印跡(Western Blot)分析。采用免疫組化和Western Blot法觀察丙泊酚對(duì)SE大鼠發(fā)作24 h后皮層和海馬NMDA受體2A、2B亞型表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:1.SE反復(fù)發(fā)作后24 h，與BLK組相比，SE組大鼠皮層和海馬NMDA受體2A、2B亞型陽(yáng)性

10、細(xì)胞數(shù)顯著增加(P<0.05)；2.與SE組相比，丙泊酚50mg/kg給藥組動(dòng)物皮層和海馬NMDA受體(2B)亞型表達(dá)顯著降低(P<0.05)。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在海馬區(qū)NR2B亞型表達(dá)顯著降低，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.05)；而NMDA受體2A亞型在各區(qū)表達(dá)均無(wú)明顯變化。3.MK-801(2mg/kg)可顯著降低皮層和海馬NMDA受體2A、2B亞型的表達(dá)，與SE組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，但安定(10mg/kg)和東莨

11、菪堿(10mg/kg)對(duì)NMDA受體2A和2B亞型無(wú)明顯影響。
　　 結(jié)論:1.SE出現(xiàn)后24h，皮層和海馬NMDA受體(2A和2B)亞型表達(dá)顯著上調(diào)。2.丙泊酚可顯著抑制皮層和海馬NMDA受體2B亞型表達(dá)，但對(duì)NMDA受體2A亞型表達(dá)無(wú)明顯影響，其作用與特異性NMDA受體拮抗劑MK-801類似，但與GABA受體激動(dòng)劑安定及抗膽堿藥東莨菪堿存在顯著差別；3.丙泊酚對(duì)擬膽堿藥匹魯卡品誘發(fā)SE的抑制作用可能與其下調(diào)NMDA受體2B亞

12、型的表達(dá)有關(guān)。
　　 第四部分：丙泊酚對(duì)匹魯卡品誘發(fā)SE大鼠大腦皮層和海馬GABAA受體α1亞型表達(dá)的影響
　　 目的:建立可逆性膽堿酯酶抑制劑匹魯卡品誘發(fā)大鼠SE模型，觀察丙泊酚對(duì)匹魯卡品誘發(fā)SE大鼠皮層和海馬GABAA受體α1亞型表達(dá)的影響。
　　 方法:50只SD大鼠隨機(jī)分為5組，包括空白對(duì)照組(BLK組)、SE組(SE組)、東莨菪堿10mg/kg組(SCOP組)、丙泊酚50mg/kg組(PPF組)及安定1

13、0mg/kg組(DZP組)。除BLK組外，其他各組動(dòng)物均腹腔注射氯化鋰(3mmol/kg)-匹魯卡品(30mg/kg)，建立匹魯卡品誘發(fā)SE模型。待SE出現(xiàn)后30min，分別給予丙泊酚50mg/kg、東莨菪堿10mg/kg及安定10mg/kg等不同治療藥物，空白對(duì)照組和模型組給予等量的生理鹽水。24 h后，取3只大鼠進(jìn)行心臟灌注后取皮層和海馬行免疫組化分析；剩余大鼠行蛋白免疫印跡分析(WesternBlot)。采用免疫組化和Wester

14、n Blot法觀察丙泊酚對(duì)SE大鼠發(fā)作24h后皮層和海馬GABAA受體α1亞型表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:1.SE出現(xiàn)后24h，皮層和海馬GABAA受體α1亞型表達(dá)均顯著降低，與BLK組相比有顯著差異(P<0.05)；2.丙泊酚50mg/kg可顯著上調(diào)皮層和海馬GABAA受體α1亞型表達(dá)，與SE組相比有顯著差異(P<0.05)；其作用類似于GABA受體激動(dòng)劑安定(10mg/kg)，而東莨菪堿(10mg/kg)對(duì)GABAA受體α1亞

15、型無(wú)明顯影響。
　　 結(jié)論:1。SE出現(xiàn)后24 h，GABAA受體α1亞型表達(dá)下調(diào)。2.丙泊酚可顯著上調(diào)GABAA受體α1亞型表達(dá)。
　　 第五部分：丙泊酚治療癲癇持續(xù)狀態(tài)的抗氧化機(jī)理研究
　　 目的:在大鼠上建立可逆性膽堿酯酶抑制劑匹魯卡品誘發(fā)SE模型，觀察丙泊酚對(duì)SE大鼠血清、皮層和海馬超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平的影響。
　　 方法:72只SD大鼠隨機(jī)分為6組，

16、包括空白對(duì)照組(BLK組)、SE組(SE組)、丙泊酚50mg/kg組(PPF組)、安定10mg/kg組(DZP組)、東莨菪堿10mg/kg組(SCOP組)及MK-801(2mg/kg)組(MK-801組)。待SE出現(xiàn)后30min，分別給予不同藥物及等容積生理鹽水。采用分光光度法測(cè)定給藥后2h及24h動(dòng)物血清、海馬及皮層內(nèi)SOD、GSH及MDA值。
　　 結(jié)果1.SE發(fā)作后30min給予各實(shí)驗(yàn)用藥(BLK組和SE組給予等容量的生理

17、鹽水)，給藥后2h，SE組血清、皮層及海馬內(nèi)SOD及MDA水平顯著升高，GSH含量顯著降低，與BLK組相比有顯著差異(P<0.01)；2。與SE動(dòng)物相比，丙泊酚給藥組動(dòng)物SOD無(wú)明顯改變，但GSH可顯著升高而MDA含量顯著降低(P<0.01)；但安定、東莨菪堿及MK-801給藥組動(dòng)物與SE組動(dòng)物相比無(wú)顯著改變。3.給藥后24 h，血清、皮層及海馬內(nèi)SOD、MDA及GSH水平與給藥后2h存在類似變化，與BLK組相比具顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

18、.01)；4.給藥后24 h，與模型組動(dòng)物相比，丙泊酚給藥組動(dòng)物血清及皮層、海馬內(nèi)GSH顯著增高，MDA顯著降低(P<0.01)，但SOD含量未見(jiàn)顯著改變；安定、東莨菪堿和MK-801給藥組動(dòng)物血清及皮層、海馬內(nèi)SOD、GSH及MDA含量與模型組相比未見(jiàn)顯著改變。
　　 結(jié)論:1.SE出現(xiàn)后2及24h，SE大鼠血清、皮層和海馬SOD活性顯著增加，GSH顯著降低、MDA顯著升高。2.在給藥后2h及24 h，丙泊酚50mg/kg均可