基于組合LC-MS-MS技術(shù)的中藥姜黃調(diào)節(jié)脂代謝紊亂活性及其成分姜黃素類化合物的全面表征和分離.pdf

1、本論文共分為四個部分。
　　第一章對以LC-MS/MS為指導(dǎo)，對姜黃（Curcuma longa L.）中姜黃素類成分進行分離和鑒定。第二章整合運用LC-MS/MS（QTOF）和LC-MS/MS（QTRAP）兩種質(zhì)譜技術(shù)，對姜黃素類化合物進行全面表征，建立了一種發(fā)現(xiàn)、識別和表征具有相似結(jié)構(gòu)類型化合物的新型分析策略。第三章基于組合 LC-MS/MS技術(shù)對姜黃的降血脂活性與血清溶血磷脂酰膽堿（LysoPC）水平進行了關(guān)聯(lián)性研究，使用靶

2、標(biāo)性脂質(zhì)組學(xué)方法篩選高脂血癥的血清LysoPC類生物標(biāo)記物。論文第四章對脂質(zhì)組學(xué)的研究方法，及其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用進行了綜述。
　　1.姜黃中姜黃素類化合物的分離和鑒定
　　姜黃是藥食同源的常用中藥，其中姜黃素類成分是其最主要的活性物質(zhì)。姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素是姜黃中最主要的三種姜黃素類成分，其余均為微量姜黃素類化合物。由于三種含量較高的姜黃素其口服吸收差，生物利用度低，難以用于臨床。因此，亟待分離出具有同等

3、、或更好活性，且生物利用度高的微量姜黃素類成分。
　　本研究從姜黃中分離得到12個姜黃素類化合物，其中1個新化合物，以及3個首次從該植物中分離得到的化合物。通過1H NMR、13C NMR、DEPT、HSQC、HMBC、1H-1H COSY、HR-MS等波譜數(shù)據(jù)分析，并結(jié)合文獻和數(shù)據(jù)庫比對，最終確定其中11個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，一個化合物結(jié)構(gòu)正在鑒定。
　　2.基于組合LC-MS/MS技術(shù)的姜黃素類成分的全面表征和鑒定

4、　　單一質(zhì)譜技術(shù)存在一定的局限性。高分辨質(zhì)譜儀如 Q-TOF質(zhì)譜，雖然具有很好的分辨率，但卻缺乏高靈敏度的靶標(biāo)性掃描模式，進而容易遺漏一些含量極微的化合物；Q-TRAP具有很高的靈敏度，雖然眾多的掃描模式對于微量成分的發(fā)現(xiàn)有很大作用，但是無法提供化合物的精確質(zhì)量數(shù)。因此本研究整合運用LC-MS/MS（QTOF）和LC-MS/MS（QTRAP）對姜黃中姜黃素類化合物進行全面的表征和鑒定。
　　本研究根據(jù)姜黃素類成分的結(jié)構(gòu)特點，首先利

5、用LC-MS/MS（QTOF）對姜黃總提物樣品進行全掃描模式分析，根據(jù)一級、二級高分辨精確分子量和保留時間（RT），總結(jié)裂解規(guī)律，確定姜黃素類化合物的庚烷母體結(jié)構(gòu)骨架。再對每一個結(jié)構(gòu)骨架的苯基上取代情況進行最大程度預(yù)測，根據(jù)裂解規(guī)律得出所有預(yù)測化合物典型的母離子/子離子。然后設(shè)置離子對，利用LC-MS/MS（QTRAP）靈敏度最高的多反應(yīng)監(jiān)測觸發(fā)增強子離子掃描定性模式（MRM-IDA-EPI）對所有預(yù)測化合物進行掃描，得到每一個MRM離

6、子對對應(yīng)的二級裂解圖和RT。最后綜合比對LC-MS/MS（QTOF）和LC-MS/MS（QTRAP）每個姜黃素類化合物的RT、母離子和子離子裂解碎片，判斷所預(yù)測化合物是否存在或匹配所推測裂解規(guī)律，最終完成姜黃素類成分的全面表征和鑒定。本研究利用該新型分析策略，共鑒定了96個姜黃素類化合物。
　　3.基于靶標(biāo)性脂質(zhì)組學(xué)的姜黃降血脂作用研究
　　溶血磷脂酰膽堿類（LysoPC）是一類具有生物學(xué)意義的細胞信號傳導(dǎo)因子類磷脂成分。本

7、研究應(yīng)用靶標(biāo)性脂質(zhì)組學(xué)的方法，將姜黃降脂活性與高脂小鼠血清LysoPC水平進行關(guān)聯(lián)性研究，應(yīng)用于高脂血癥的潛在生物標(biāo)記物篩選和姜黃降血脂的藥效學(xué)評價。
　　本研究利用LC-MS/MS（QTOF）技術(shù)鑒定了小鼠血清中74個LysoPCs成分；然后利用 LC-MS/MS（QTRAP）的 MRM模式靶標(biāo)性的對正常組、模型組、陽性組、以及姜黃給藥低和高劑量組，共五組小鼠血清中的59個LysoPCs進行相對定量分析；結(jié)果表明預(yù)防性食用姜黃能