PI3K-Akt在Wnt5a誘導的人骨肉瘤細胞遷移中作用機制的研究.pdf

1、目的：研究Wnt5a是否能誘導骨肉瘤細胞的遷移，并探討PI3K/Akt信號通路是否參與到這個過程。
　　方法：人骨肉瘤MG-63細胞首先被培養(yǎng)在包含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中。在行劃痕實驗時先將細胞接種在96孔板中，待細胞張滿后，血清饑餓24小時，采用塑料無菌槍頭行劃痕。然后在人重組Wnt5a刺激下觀察10小時后的變化，并用相機采集圖像，觀察其細胞遷移行為學結(jié)果。再用siRNA阻斷Akt，觀察其細胞遷移情況的變化。在上述過程中

2、蛋白水平的變化采用western blot的方法進行檢測。
　　結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)Wnt5a刺激能夠促進人骨肉瘤MG-63細胞的遷移，而Wnt5a使用的劑量為100 ng/ml。在這個過程中PI3K/Akt信號通道蛋白的磷酸化介導了這個過程。我們采用LY294002來阻斷PI3K時，發(fā)現(xiàn)Wnt5a誘導MG-63細胞的遷移能力降低，同時Akt(p-Ser473)的磷酸化減少。另外，siRNA阻斷Akt，MG-63細胞的遷移能力亦降低。<