PI3K-Akt通路在洛克沙胂促血管生成中的作用.pdf

1、目的:洛克沙胂(Rox)即3-硝基-4-羥基苯胂酸，是一種在世界范圍內(nèi)被廣泛使用的有機(jī)胂畜禽飼料添加劑。洛克沙胂在體內(nèi)吸收很少，絕大多數(shù)隨糞便排泄。畜禽糞便作為有機(jī)肥使用后，增加了環(huán)境中砷水平及人類(lèi)砷污染的風(fēng)險(xiǎn)。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于洛克沙胂促血管生成的研究較少，洛克沙胂促血管生成的機(jī)制尚不明確。本文通過(guò)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移及管形成體外試驗(yàn)，以及小鼠B16F10黑色素移植瘤模型，研究洛克沙胂體內(nèi)外促血管生長(zhǎng)中PI3K/Akt信號(hào)機(jī)制。<

2、br>　　方法:大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)不同處理后，通過(guò)MTT試驗(yàn)、BrdU增殖試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)、管形成試驗(yàn)，分別檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞的活力、增殖、遷移和體外管形成能力;通過(guò)Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中PI3K/Akt信號(hào)蛋白和VEGF的表達(dá)。不同處理分組如下:空白對(duì)照組(PBS)、陽(yáng)性對(duì)照組(10ng/mL VEGF)，洛克沙胂處理組(0.1μmol/L、1.0μmol/L和10.0μmol/L Rox)，PI3K抑制劑處理組（20.0μm

3、ol/L LY294002）和共處理組(20.0μmol/L LY294002+1.0μmol/L Rox)。
　　在小鼠黑色素移植瘤模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，不同處理分組如下:空白對(duì)照組(PBS)、低劑量Rox組(1mg/Kg)、中劑量Rox組(5mg/Kg)、高劑量Rox組(25mg/Kg)。在注射B16F10細(xì)胞7d后，各處理組接受灌胃，每天一次，持續(xù)7d。測(cè)量小鼠體重、荷瘤體積及重量;對(duì)腫瘤組織進(jìn)行HE染色及VEGF免疫組化分析，

4、Western Blot分析PI3K/Akt信號(hào)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:0.1～10.0μmol/L洛克沙胂處理血管內(nèi)皮細(xì)胞，能夠增加MTT試驗(yàn)中的OD值，增殖試驗(yàn)中的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、劃痕試驗(yàn)中的遷移距離，以及管形成中的管數(shù);增加細(xì)胞中PI3K/Akt蛋白的磷酸化水平、VEGF的表達(dá)。與PBS對(duì)照組比較，1.0μmol/L組差異顯著（P＜0.05），0.1μmol/L和10.0μmol/L組無(wú)顯著性差異。PI3K抑制劑LY29

5、4002能夠顯著地降低1.0μmol/L洛克沙胂引起的細(xì)胞活力、BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、遷移距離，以及管形成中管數(shù)的增加;顯著地降低由1.0μmol/L洛克沙胂增加的細(xì)胞中PI3K/Akt蛋白的磷酸化水平以及VEGF的表達(dá)。LY294002和1.0μmol/L Rox共處理組與1.0μmol/L Rox組比較，差異極顯著（P＜0.01）。洛克沙胂促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和體外血管樣結(jié)構(gòu)的形成，PI3K/Akt信號(hào)在洛克沙胂體外促內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)

6、及管形成中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。
　　小鼠黑色素移植瘤的試驗(yàn)中，結(jié)果表明不同劑量(1～25mg/kg)洛克沙胂能夠增加B16F10移植瘤的重量和體積，增加了腫瘤組織中VEGF的表達(dá)和PI3K/Akt蛋白的磷酸化水平。與對(duì)照組比較，25mg/Kg組差異顯著（P＜0.05），1mg/Kg和5mg/Kg組差異不顯著。洛克沙胂對(duì)小鼠B16F10移植瘤的生長(zhǎng)及腫瘤血管的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，PI3K/Akt信號(hào)在洛克沙胂促小鼠移植瘤生長(zhǎng)中發(fā)揮作用。