內(nèi)源性硫化氫合成酶CBS參與孕期應(yīng)激誘發(fā)成年子代大鼠內(nèi)臟高敏的分子機(jī)制.pdf

1、目的：功能性消化不良(Functional dyspepsia，F(xiàn)D)是一種以慢性內(nèi)臟痛和胃腸功能紊亂為特征的功能性疾病，但其內(nèi)臟痛發(fā)生的具體機(jī)制尚未明確。越來越多的研究表明孕期慢性不良應(yīng)激可能會對子代產(chǎn)生長期的影響，從而導(dǎo)致胚胎源性疾病。本實驗研究孕期應(yīng)激(Prenatal Maternal Stress, PMS)是否能誘導(dǎo)成年子代雄性大鼠胃部痛覺高敏、以及內(nèi)源性硫化氫和電壓門控型鈉通道在該慢性內(nèi)臟痛模型中的作用。
　　方法：

2、
　　1.將SD雌性孕鼠分成實驗(PMS)組和對照(CON)組兩組，PMS組孕鼠從懷孕的第6天開始每天隨機(jī)經(jīng)歷一種異源型間隙性應(yīng)激(Heterotypical Intermittent Stress, HIS)，直至第22天，從而誘導(dǎo)大鼠的慢性內(nèi)臟痛過敏模型。子代出生后挑選雄性個體，待其6周后進(jìn)行胃擴(kuò)張(Gastric Distention, GD)實驗等行為學(xué)實驗。
　　2.運(yùn)用 western blotting方法檢測成

3、年子代雄性大鼠胃特異性DRG T7-T10神經(jīng)元和胃粘膜中硫化氫合酶胱硫醚-β-合成酶(Cystathionineβ-synthase, CBS)、電壓門控型鈉通道Nav1.7和Nav1.8亞型的表達(dá)。
　　3.腹腔注射CBS拮抗劑AOAA翻轉(zhuǎn)子代雄性大鼠的痛行為反應(yīng)，并檢測胃相關(guān)DRG神經(jīng)元中Nav1.7和Nav1.8的表達(dá)。
　　4.檢測30例臨床FD患者胃粘膜中CBS、Nav1.7和Nav1.8蛋白的表達(dá)。
　　

4、結(jié)果：
　　1. PMS明顯增加成年子代雄性大鼠對胃擴(kuò)張的痛敏反應(yīng)，表現(xiàn)為6、8周時EMG振幅顯著高于對照組，至第10周和12周時，EMG振幅基本恢復(fù)至正常水平。
　　2.與對照組相比，PMS組子代大鼠在第6、8周時胃相關(guān)DRG神經(jīng)元中CBS、NaV1.7、NaV1.8蛋白的表達(dá)顯著升高(6周時，CBS、Nav1.7和Nav1.8：1.15±0.06 VS0.72±0.08、1.84±0.18 VS1.07±0.21和1.5

5、3±0.06 VS1.19±0.08；8周時，CBS、Nav1.7和Nav1.8：0.85±0.21 VS0.31±0.07、1.15±0.05 VS0.43±0.03和3.06±0.34 VS1.37±0.32，均*P＜0.05)。
　　3. PMS組子代大鼠腹腔注射CBS拮抗劑AOAA后明顯翻轉(zhuǎn)PMS引起的子代大鼠內(nèi)臟痛覺反應(yīng)，并且呈一定的劑量和時間效應(yīng)關(guān)系，觀察到最優(yōu)劑量為5mg/kg。連續(xù)7天腹腔注射最優(yōu)劑量AOAA5mg

6、/kg后，鎮(zhèn)痛作用至少持續(xù)24小時。與行為學(xué)實驗相一致，AOAA可使PMS誘導(dǎo)的胃相關(guān)DRG神經(jīng)元中升高的Nav1.7和Nav1.8蛋白下降(NaV1.7：n=4，0.66±0.077 VS1.15±0.17，*P＜0.05；NaV1.8：n=4,0.58±0.11 VS1.78±0.30，*P＜0.05)。
　　4.在6周時，PMS處理后的子代大鼠的胃粘膜CBS、Nav1.7和Nav1.8的表達(dá)與對照組相比較均上調(diào)，具有顯著性差

7、異（CBS：0.76±0.09 VS0.46±0.04，*P＜0.05；Nav1.7和Nav1.8：1.52±0.07 VS0.62±0.06和1.68±0.09 VS1.13±0.06，*P＜0.05，*P＜0.05）。
　　5.運(yùn)用Western blotting方法檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比較，F(xiàn)D患者胃粘膜中CBS、Nav1.7和Nav1.8蛋白的表達(dá)明顯升高(CBS：n=4,1.03±0.08 VS0.77±0.07，*

8、P＜0.05；Nav：n=3，0.95±0.08 VS0.41±0.01，*P＜0.05；Nav1.8：n=3，0.79±0.11 VS0.378±0.07，*P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　孕期應(yīng)激可誘導(dǎo)成年子代雄性大鼠慢性內(nèi)臟痛覺高敏，并可能通過CBS-H2S信號通路介導(dǎo)電壓門控型鈉通道Nav1.7和Nav1.8亞型參與功能性消化不良的發(fā)生。本研究在一定程度上揭示了功能性消化不良慢性內(nèi)臟痛產(chǎn)生的分子機(jī)制，為胃腸道的功能