內源性硫化氫合成酶CBS參與孕期應激誘發(fā)成年子代大鼠內臟高敏的分子機制.pdf

1、目的：功能性消化不良(Functional dyspepsia，F(xiàn)D)是一種以慢性內臟痛和胃腸功能紊亂為特征的功能性疾病，但其內臟痛發(fā)生的具體機制尚未明確。越來越多的研究表明孕期慢性不良應激可能會對子代產生長期的影響，從而導致胚胎源性疾病。本實驗研究孕期應激(Prenatal Maternal Stress, PMS)是否能誘導成年子代雄性大鼠胃部痛覺高敏、以及內源性硫化氫和電壓門控型鈉通道在該慢性內臟痛模型中的作用。
　　方法：

2、
　　1.將SD雌性孕鼠分成實驗(PMS)組和對照(CON)組兩組，PMS組孕鼠從懷孕的第6天開始每天隨機經歷一種異源型間隙性應激(Heterotypical Intermittent Stress, HIS)，直至第22天，從而誘導大鼠的慢性內臟痛過敏模型。子代出生后挑選雄性個體，待其6周后進行胃擴張(Gastric Distention, GD)實驗等行為學實驗。
　　2.運用 western blotting方法檢測成

3、年子代雄性大鼠胃特異性DRG T7-T10神經元和胃粘膜中硫化氫合酶胱硫醚-β-合成酶(Cystathionineβ-synthase, CBS)、電壓門控型鈉通道Nav1.7和Nav1.8亞型的表達。
　　3.腹腔注射CBS拮抗劑AOAA翻轉子代雄性大鼠的痛行為反應，并檢測胃相關DRG神經元中Nav1.7和Nav1.8的表達。
　　4.檢測30例臨床FD患者胃粘膜中CBS、Nav1.7和Nav1.8蛋白的表達。
　　

4、結果：
　　1. PMS明顯增加成年子代雄性大鼠對胃擴張的痛敏反應，表現(xiàn)為6、8周時EMG振幅顯著高于對照組，至第10周和12周時，EMG振幅基本恢復至正常水平。
　　2.與對照組相比，PMS組子代大鼠在第6、8周時胃相關DRG神經元中CBS、NaV1.7、NaV1.8蛋白的表達顯著升高(6周時，CBS、Nav1.7和Nav1.8：1.15±0.06 VS0.72±0.08、1.84±0.18 VS1.07±0.21和1.5

5、3±0.06 VS1.19±0.08；8周時，CBS、Nav1.7和Nav1.8：0.85±0.21 VS0.31±0.07、1.15±0.05 VS0.43±0.03和3.06±0.34 VS1.37±0.32，均*P＜0.05)。
　　3. PMS組子代大鼠腹腔注射CBS拮抗劑AOAA后明顯翻轉PMS引起的子代大鼠內臟痛覺反應，并且呈一定的劑量和時間效應關系，觀察到最優(yōu)劑量為5mg/kg。連續(xù)7天腹腔注射最優(yōu)劑量AOAA5mg

6、/kg后，鎮(zhèn)痛作用至少持續(xù)24小時。與行為學實驗相一致，AOAA可使PMS誘導的胃相關DRG神經元中升高的Nav1.7和Nav1.8蛋白下降(NaV1.7：n=4，0.66±0.077 VS1.15±0.17，*P＜0.05；NaV1.8：n=4,0.58±0.11 VS1.78±0.30，*P＜0.05)。
　　4.在6周時，PMS處理后的子代大鼠的胃粘膜CBS、Nav1.7和Nav1.8的表達與對照組相比較均上調，具有顯著性差

7、異（CBS：0.76±0.09 VS0.46±0.04，*P＜0.05；Nav1.7和Nav1.8：1.52±0.07 VS0.62±0.06和1.68±0.09 VS1.13±0.06，*P＜0.05，*P＜0.05）。
　　5.運用Western blotting方法檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比較，F(xiàn)D患者胃粘膜中CBS、Nav1.7和Nav1.8蛋白的表達明顯升高(CBS：n=4,1.03±0.08 VS0.77±0.07，*

8、P＜0.05；Nav：n=3，0.95±0.08 VS0.41±0.01，*P＜0.05；Nav1.8：n=3，0.79±0.11 VS0.378±0.07，*P＜0.05)。
　　結論：
　　孕期應激可誘導成年子代雄性大鼠慢性內臟痛覺高敏，并可能通過CBS-H2S信號通路介導電壓門控型鈉通道Nav1.7和Nav1.8亞型參與功能性消化不良的發(fā)生。本研究在一定程度上揭示了功能性消化不良慢性內臟痛產生的分子機制，為胃腸道的功能