西北地區(qū)甲狀腺功能減低癥患者DUOX2基因突變篩查和研究.pdf

1、先天性甲狀腺功能減低癥(congenital hypothyroidism，CH)是一種常見的由于甲狀腺發(fā)育不全或者甲狀腺內分泌機能障礙而引起的內分泌疾病。研究發(fā)現由于甲狀腺激素分泌不足導致的CH多數是遺傳因素導致的，雙氧化物酶2(DUOX2)基因作為甲狀腺激素合成的關鍵基因，其突變對CH的形成有著重要的影響。
　　本研究共招募到西北地區(qū)135例CH患者和100例健康個體，采用高通量測序的方法對患者DUOX2全外顯子和外顯子內含子

2、剪接處進行測序，同時對篩選出來的候選致病位點進行一代測序驗證，并在100例健康樣本對照中進行頻率驗證。然后利用計算生物學的方法對這些潛在致病位點的功能和效應進行分析，同時分析DUOX2突變譜和CH臨床表型的關系，并且根據美國醫(yī)學遺傳學與基因組學學會和美國分子病理學會(ACMG/AMP)序列變異注釋標準對其進行致病等級的劃分。
　　結果發(fā)現:在135例CH患者中共檢測到49個罕見突變和2個功能多態(tài)性位點。在49個罕見突變中，有35個

3、是錯義突變，6個插入缺失突變，6個無義突變和2個剪接突變，其中11個是首次發(fā)現的新突變，它們在健康對照中的頻率均小于1％。在135例患者中DUOX2突變檢出率為60.7％(82/135)，并且有4個熱點突變(p.R1110Q，p.S1067L，p.R885Q，p.K530X)在CH患者和健康對照組中存在顯著差異。采用SIFT，PolyPhen-2，MutationTaster，FATHMM，M-CAP等5個蛋白質功能預測軟件對所有錯義和

4、無義突變的分析發(fā)現21個突變可能會損害蛋白質的功能;利用MaxEntScan，NetGene2和BDGP3個軟件對剪接突變分析發(fā)現2個突變(IVS28+1G＞T，IVS17+1G＞T)都可能會損害蛋白質的功能。研究發(fā)現患者所攜帶DUOX2的突變類型和位點數與臨床表型沒有直接的關系，其基因型和臨床表型之間存在非常復雜的關系。對新發(fā)現的疑似致病位點進行7個物種間序列保守性分析，結果發(fā)現4個(p.D137E，p.R434_S440del，p.

5、F591S，p.M1093V)位于保守區(qū)，可能對蛋白質結構和功能產生影響。最后綜合目前已知的所有證據，根據ACMG/AMP對疑似致病位點的致病等級的劃分標準，發(fā)現7個突變位點(p.R1110Q，p.R885Q，IVS28+1G＞T，p.R842X，IVS17+1G＞T，p.K530X，p.Q481X)為致病的(pathogenic)、9個可能致病的(likeyly pathogenic)、33個意義不明的(variants of unk

6、nown significance)以及2個(p.S1067L，p.H678R)良性突變位點(benign)。另外，本研究發(fā)現的兩個功能多態(tài)性位點中，p.S1067L與CH的發(fā)生風險增高有關(OR=2.2，P=0)。
　　總之，本研究首次采用高通量測序技術對西北地區(qū)CH患者的DUOX2基因突變進行篩查研究，分析了西北地區(qū)甲低患者中DUOX2突變的類型、特點、以及與臨床表型的關系，這對于擴大DUOX2基因突變譜，進一步了解CH致病機