Marie Unna型遺傳性稀毛癥致病基因突變篩查及功能研究.pdf

1、研究背景：Marie Unna型遺傳性稀毛癥（MUHH）是臨床上一種罕見的常染色體顯性遺傳性毛發(fā)疾病。該病由德國學者Marie Unna于1925年首次報道。受累個體臨床表現(xiàn)為在出生時毛發(fā)稀少或缺失；在幼童時期頭發(fā)開始緩慢生長呈現(xiàn)特有的粗糙、不規(guī)則扭曲和金屬絲樣外觀；從青春期開始，頭發(fā)彌漫性脫落并逐漸加重，脫發(fā)以頭頂部開始，嚴重者可發(fā)展為禿頭。大部分患者體毛、睫毛、眉毛和第二性征毛發(fā)非常稀少或缺如?；颊卟话橛衅渌到y(tǒng)性疾病，男性受累較女

2、性嚴重。組織病理學檢查顯示，在毛囊周圍沒有顯著的炎性細胞浸潤或纖維化，但成熟的毛囊數(shù)量顯著減少、毛囊縮小，毛囊中沒有毛發(fā)。電鏡顯示毛發(fā)不規(guī)則扭曲，出現(xiàn)縱溝、縱裂、不規(guī)則橫斷面、毛小皮廣泛的剝脫和毛鞘異常。MUHH具有遺傳異質性，迄今為止，該病已有兩個致病基因位點分別被定位在8p21和1p21.1–1q21.3上，其中8p21已被多個研究小組證實，該區(qū)域包含人無毛基因HR基因。國內外多個研究小組先后對MUHH患者進行HR基因編碼區(qū)的突變分

3、析，然而均未檢測到HR基因突變。在HR基因5′非翻譯區(qū)有4個上游開放閱讀框架（uORF），從5′→ 3′分別命名為U1HR,U2HR,U3HR以及 U4HR，其中U2HR是HR基因的的一個抑制性uORF，直接比鄰HR基因編碼區(qū)的引導序列，編碼一種由34個氨基酸組成的小分子多肽。近來，在一個中國漢族MUHH大家系的HR基因的U2HR區(qū)域鑒定了一個致病的起始密碼突變并在其他18個祖先來源不同的MUHH家系中共發(fā)現(xiàn)了12個U2HR突變，建立了

4、U2HR的突變缺陷譜。功能研究顯示這些不同的突變都導致下游HR基因mORF生理條件下翻譯效率增強,引起HR蛋白過表達。
　　 目的：⑴分析3個中國MUHH家系及4個散發(fā)患者的臨床特征；⑵檢測中國漢族人MUHH患者HR基因的U2HR基因突變，分析MUHH的突變篩查結果，以期獲得更多的基因型和表型的相關信息并進一步驗證遺傳性疾病的新的發(fā)病機理；⑶分析HR基因mRNA表達水平和蛋白表達水平變化，以期獲得更多的U2HR突變對HR基因表達

5、影響的新信息。
　　 方法：①采用家系調查、組織病理學檢查和掃描電鏡檢查分析MUHH患者的臨床表現(xiàn)；②采用PCR反應擴增HR基因的U2HR區(qū)域，用直接測序法對1個中國MUHH家系及4個散發(fā)MUHH患者進行U2HR的基因突變檢測；③通過Pubmed及中國醫(yī)學光盤CBM,對MUHH基因突變報道進行總結；④采用Real-Time PCR的方法分析有突變的MUHH患者、無突變的MUHH患者和健康對照外周血單一核細胞中HR基因mRNA表達

6、水平變化；⑤采用Western-blot的方法分析有突變的MUHH患者、無突變的MUHH患者和健康對照之間蛋白質表達水平變化。
　　 結果：⑴MUHH的遺傳模式為常染色體顯性遺傳，所有患者未見表型差異，未能發(fā)現(xiàn)基因型和表型之間的明確相關性；⑵在一例散發(fā)MUHH患者HR基因U2HR中檢測到1個錯義突變c.77A>C (p.E26A)。在該患者的健康父親及100例正常對照中均不存在上述突變；⑶HR基因mRNA水平相對表達結果顯示，有

7、突變的MUHH患者、無突變的MUHH患者及健康對照之間均無顯著性差異；⑷Western-blot結果顯示，有突變的MUHH患者外周血單一核細胞中的HR蛋白質水平的相對表達較健康對照顯著增高。
　　 結論：①本研究利用直接測序的方法在1個中國MUHH家系及4個散發(fā)病例中共檢測出HR基因的U2HR的1個新的錯義突變（c.77A>C），豐富了U2HR基因突變譜；總結了MUHH突變篩查結果，推測U2HR的突變熱點可能位于U2HR的第24