先天性甲狀腺功能減低伴甲狀腺腫大患者DUOX2基因突變篩查及其分子致病機(jī)理的初步研究.pdf

1、目的:研究中國先天性甲狀腺功能減低(CH)伴甲狀腺腫大患者雙氧化酶2(DUOX2)基因突變的類型和特點，構(gòu)建其基因型與表型關(guān)系譜，從而為DUOX2基因突變篩選平臺的建立奠定基礎(chǔ);構(gòu)建DUOX2基因野生型和突變型真核表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究DUOX2基因突變導(dǎo)致CH的分子致病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:本研究選取山東地區(qū)67例CH伴甲狀腺腫大患者為研究對象，采集其外周靜脈血，提取基因組DNA，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增與直接測序

2、的方法對DUOX2全部外顯子進(jìn)行基因突變檢測，結(jié)合測序結(jié)果及臨床資料，研究中國人群CH伴甲狀腺腫大患者DUOX2基因突變類型和特點，構(gòu)建基因型與表型關(guān)系譜。留取新鮮的甲狀腺組織進(jìn)行RNA提取，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，設(shè)計相應(yīng)引物擴(kuò)增DUOX2和（雙氧化酶成熟因子2）DUOXA2全編碼基因，經(jīng)酶切、連接、轉(zhuǎn)化、篩選構(gòu)建DUOX2和DUOXA2野生型表達(dá)載體，然后利用突變試劑盒進(jìn)行DUOX2突變體構(gòu)建;野生型重組子及突變體均采用直接測序驗證。

3、r>　　 結(jié)果：本研究共發(fā)現(xiàn)了3種DUOX2基因復(fù)合雜合突變(c.2202G＞A/c.3391G＞T，c.2101C＞T/c.3541T＞G，c.2202G＞A/c.3329G＞A)及5種DUOX2單等位基因雜合突變(c.1979T＞A, c.3616G＞A, c.3329G＞A, c.298A＞G, c.3799C＞T)。其中，c.2202G＞A/c.3391G＞T突變攜帶者表現(xiàn)為永久性甲減，而c.2101C＞T/c.3541T＞G

4、攜帶者表現(xiàn)為暫時性甲減;來自兩個無關(guān)家庭的兩例c.3616G＞A先證者分別表現(xiàn)為永久性甲減和暫時性甲減;來自兩個無關(guān)家庭的兩例c.3329G＞A先證者，一例表現(xiàn)為輕度甲減，另一例表現(xiàn)為重度甲減，后者因合并先天性心臟病于出生后6個月死亡。本研究成功構(gòu)建了野生型和兩種突變體(c.C1329T和c.C2101T)的pCDNA3.1/DUOX2重組子，以及野生型pCDNA3.1/DUOXA2重組子。
　　 結(jié)論：通過對67例CH伴甲狀腺

5、腫大患者進(jìn)行DUOX2基因突變篩查，共發(fā)現(xiàn)了10例DUOX2基因突變攜帶者，表明DUOX2基因在中國CH伴甲狀腺腫大患者中的突變率較高，是中國CH伴甲狀腺腫大患者的重要致病基因。DUOX2單等位基因雜合突變或復(fù)合雜合突變，均可表現(xiàn)為暫時性CH或永久性CH，其甲狀腺功能減低程度則由輕度到重度不等，由此可見，DUOX2基因型與表型的關(guān)系相當(dāng)復(fù)雜。另外，在野生型及突變型重組子構(gòu)建完成的基礎(chǔ)上，可對DUOX2基因突變導(dǎo)致CH的分子致病機(jī)理進(jìn)行更