基于MAPK通路探討PAS-Na對(duì)鉛誘導(dǎo)體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:研究主要探討鉛誘導(dǎo)體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞損傷、凋亡相關(guān)基因與蛋白表達(dá)的影響，以及對(duì)氨基水楊酸鈉(PAS-Na)的干預(yù)作用效果。
　　方法:PC12細(xì)胞經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)代培養(yǎng)，分別(1)經(jīng)0、1、10、100、1000μmol·L-l五個(gè)濃度梯度的醋酸鉛單獨(dú)作用24h，(2)單獨(dú)給予0、5、50、100、500μmol·L-1五個(gè)濃度梯度的PAS-Na作用24h，用倒置相差顯微鏡觀察PC12細(xì)胞的形態(tài)，使用MTT法測(cè)定各個(gè)組的細(xì)胞存活率

2、。(3) PC12細(xì)胞被隨機(jī)分為正常對(duì)照組、鉛模型組、醋酸鉛+ PAS-Na20，100和500μmol·L-1劑量干預(yù)組。正常對(duì)照組和正常+PAS-Na500μmol·L-1組細(xì)胞于正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h后棄培養(yǎng)液，前者加入正常培養(yǎng)液、后者加入PAS-Na繼續(xù)培養(yǎng)24 h。醋酸鉛模型組及醋酸鉛+PAS-Na20，100和500μmol·L-1組先與醋酸鉛（終濃度10μmol·L-1）共培養(yǎng)24 h后棄培養(yǎng)液，再加入相應(yīng)濃度PAS-N

3、a繼續(xù)培養(yǎng)24 h。用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率，試劑盒方法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)含量，Hoechst33342熒光染色及Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PC12細(xì)胞早期凋亡率，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法測(cè)定P53、Caspase-3、Caspase-9和MAPK14 mRNA表達(dá)量，蛋白免疫印跡法(WB)測(cè)定P53、Bax、Bcl-2、Capsase-3、Caspase-9及MAPK通路的T-/P-JNK、

4、T-/P-ERK、T-/P-P38蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)鉛可引起PC12細(xì)胞的形態(tài)損傷及存活率呈劑量-反應(yīng)性下降。
　　(2)高濃度（5000μmol·L-1）PAS-Na可使PC12細(xì)胞存活率降低，其它劑量組的存活率與對(duì)照組無(wú)差異。
　　(3)鉛模型組PC12細(xì)胞皺縮、突起稀少。與正常對(duì)照組比較，醋酸鉛模型組細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞凋亡形態(tài)變化典型、細(xì)胞凋亡率增高、細(xì)胞內(nèi)GSH含量降低，P53、Casp

5、ase-3、Caspase-9和MAPK14 mRNA表達(dá)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P53、Bax、activated Capsase-3、activated Caspase-9和p-JNK蛋白表達(dá)均升高，p-ERK和Bcl-2表達(dá)下降;正常+PAS-Na500μmol·L-1組上述指標(biāo)未見(jiàn)明顯變化。
　　(4)與醋酸鉛模型組比較，醋酸鉛+PAS-Na100和500μmol-L-1組PC12細(xì)胞存活率增高和細(xì)胞凋亡率降低，各PAS

6、-Na干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)GSH含量增高，PAS-Na干預(yù)或治療對(duì)上述鉛誘導(dǎo)改變的基因均有不同程度的下調(diào)，其中醋酸鉛+PAS-Na100和500μmol·L-1組P53、Caspase-3、Caspase-9和MAPK14 mRNA表達(dá)改變下調(diào)較為明顯。PAS-Na干預(yù)可不同程度的上調(diào)p-ERK和Bcl-2表達(dá)、下調(diào)P53、Bax、activated Capsase-3、和p-JNK蛋白表達(dá)白水平，但對(duì)activated Caspase-9和P

7、38蛋白的表達(dá)影響不大。
　　結(jié)論:
　　(1)鉛暴露引起PC12細(xì)胞存活率和凋亡率降低，PAS-NA對(duì)鉛致PC12細(xì)胞存活率下降和細(xì)胞凋亡增加有一定的保護(hù)作用。
　　(2)鉛暴露會(huì)降低PC12細(xì)胞內(nèi)GSH含量，PAS-Na對(duì)鉛致PC12細(xì)胞內(nèi)GSH含量降低具有一定的拮抗作用。
　　(3)鉛暴露引起PC12細(xì)胞P53、Caspase-3、Caspase-9和MAPK14mRNA表達(dá)水平升高。PAS-Na對(duì)鉛致P5