氧化應(yīng)激對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞中SMP30蛋白表達(dá)變化的影響.pdf

1、目的:觀察氧化應(yīng)激對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞(human lens epithelialcells，HLECs)中衰老標(biāo)記蛋白30(Senescence Marker Protein30，SMP30)表達(dá)變化的影響，為今后研究其在人晶狀體上皮細(xì)胞及白內(nèi)障發(fā)生發(fā)展過程中的作用奠定基礎(chǔ)。
　　方法:用不同濃度過氧化氫(0、100、200、300μ M)刺激人晶狀體上皮細(xì)胞24小時(shí)，建立不同濃度急性氧化應(yīng)激模型，通過光鏡、MTT檢測(cè)分析細(xì)胞形態(tài)

2、、狀態(tài)，Western blot檢測(cè)SMP30蛋白的表達(dá)情況。用不同濃度過氧化氫（0、25、50、75、100、125、150μM）刺激人晶狀體上皮細(xì)胞2周，建立慢性氧化應(yīng)激模型，誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，通過光鏡、MTT、β-半乳糖苷酶衰老細(xì)胞染色、細(xì)胞周期檢測(cè)細(xì)胞氧化應(yīng)激情況及評(píng)估細(xì)胞狀態(tài)，用q-PCR、Western blot檢測(cè)SMP30基因及蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:過氧化氫刺激HLECs24小時(shí)，隨著過氧化氫濃度的增高，各處理組

3、細(xì)胞在光鏡下可見密度逐漸下降，變大變圓，300μM處理組細(xì)胞破碎，MTT結(jié)果提示細(xì)胞生存率逐漸降低，各濃度處理組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），SMP30在100、200μ M處理組的蛋白表達(dá)量均較對(duì)照組升高（P均＜0.05）。過氧化氫刺激HLECs14天后25μ M處理組細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照組無明顯差異，50-125μ M處理組細(xì)胞密度逐漸下降，細(xì)胞呈衰老狀態(tài)，150μ M處理組細(xì)胞碎裂。MTT結(jié)果提示25-50μ M處理組

4、較對(duì)照組相比生長曲線逐漸下移，75μ M處理組僅維持細(xì)胞基本代謝活性，100-150μ M處理組生長曲線則在早期大幅下降并維持。β-半乳糖苷酶衰老細(xì)胞染色顯示隨過氧化氫濃度升高，衰老陽性細(xì)胞增多，75-150μ M處理組陽性細(xì)胞較對(duì)照組明顯增多且＞90％，細(xì)胞周期則提示50-100μ M處理組細(xì)胞增值阻滯于S和G2/M期，PI值逐漸升高。SMP30在25-100μ M處理組與對(duì)照組相比mRNA表達(dá)均下降（P均＜0.01）。在25-50μ

5、 M處理組SMP30蛋白的表達(dá)量與對(duì)照組相比無明顯差異（P=-0.695，P=-0.126）。在75-100μ M處理組SMP30蛋白的表達(dá)量均較對(duì)照組明顯下降（P均＜0.01）。
　　結(jié)論:SMP30蛋白在處于急性氧化應(yīng)激狀態(tài)下的人晶狀體上皮細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。而在慢性氧化應(yīng)激誘導(dǎo)衰老的早期階段SMP30表達(dá)無明顯變化，隨著氧化應(yīng)激增加和衰老加劇，SMP30的表達(dá)減少。SMP30參與人晶狀體上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷過程，可能與細(xì)胞衰老及