SDF-1-CXCR4-ROCK2信號通路介導(dǎo)全反式維甲酸抑制軟骨形成的作用.pdf

1、目的：
　　研究全反式維甲酸（ATRA）對大鼠后肢芽間充質(zhì)細胞軟骨形成的抑制作用，并探討其相關(guān)的分子機制。
　　方法：
　　乳酸脫氫酶（LDH）法檢測ATRA對大鼠后肢芽間充質(zhì)細胞的毒性作用，CCK8檢測ATRA對大鼠后肢芽間充質(zhì)細胞增殖和聚集的作用，免疫組織化學(xué)檢測ATRA對其誘導(dǎo)構(gòu)建的CCF胎鼠模型脛骨中軟骨形成特異性因子SOX9和COL2A1表達的影響， qRT-PCR和Western blotting檢測 AT

2、RA對 SOX9和 COL2A1，以及 ROCK2基因、SDF-1和其受體CXCR4表達的影響。
　　結(jié)果：
　　體內(nèi)實驗中，ATRA誘導(dǎo)的CCF胎鼠模型脛骨SOX9和COL2A1表達量比對照組顯著減少。體外實驗中， ATRA對大鼠后肢芽間充質(zhì)細胞的增殖具有劑量依賴性抑制作用。qRT-PCR結(jié)果顯示， ATRA劑量依賴性抑制SOX9和COL2A1的mRNA轉(zhuǎn)錄水平。同樣的， Western blotting結(jié)果顯示，ATRA

3、呈劑量依賴性下調(diào)SOX9和COL2A1的蛋白表達水平。相反的，ATRA顯著上調(diào)ROCK2，SDF-1，CXCR4的mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平,且具有劑量依賴性。為了進一步研究 ATRA抑制大鼠后肢軟骨發(fā)育的分子機制，我們分別應(yīng)用RhoA/ROCK2信號通路和SDF-1/CXCR4信號通路的阻滯劑Y27632和AMD3100，二者使ATRA抑制的SOX9和COL2A1表達量顯著增加。此外，我們發(fā)現(xiàn)應(yīng)用AMD3100阻滯SDF-1/CXCR