鈷轉(zhuǎn)運蛋白II基因多態(tài)性及血清同型半胱氨酸、葉酸和維生素B12水平與炎癥性腸病的關系.pdf

1、目的：
　　炎癥性腸病(IBD)是一類病因尚未完全闡明的慢性腸道非特異性炎癥性疾病，主要包括潰瘍性結腸炎(UC)和克羅恩病(CD)兩個臨床亞型。目前認為IBD主要是由遺傳、免疫、環(huán)境、感染等因素共同作用于遺傳易感者，使機體發(fā)生針對自身腸道菌群的異常免疫應答，最終導致腸組織出現(xiàn)難以控制的炎癥反應。研究證實同型半胱氨酸(Hcy)不僅參與炎癥過程，還在固有免疫和獲得性免疫中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。血清Hcy水平異常升高與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風

2、濕性關節(jié)炎、銀屑病等自身免疫性疾病的發(fā)病密切相關。血清Hcy水平主要受亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)、蛋氨酸合成酶(MTR)和蛋氨酸合成還原酶(MTRR)等限速酶影響；葉酸、維生素(Vit)B12也是影響Hcy代謝的重要營養(yǎng)因素。研究表明鈷轉(zhuǎn)運蛋白II(TCN2)基因多態(tài)性能調(diào)節(jié)VitB12的生物利用度，因此能間接影響Hcy代謝。我們的前期工作證實Hcy代謝相關酶MTHFR(rs1801133, rs1801131, rs22749

3、76)、MTR(rs1805087)和MTRR(rs1801394)基因多態(tài)性與漢族人群UC易感性相關。本研究擬在浙江籍漢族人群中進一步探討TCN2基因多態(tài)性及血清Hcy、葉酸和VitB12水平與IBD易感性的相關性，旨在為進一步揭示IBD的遺傳免疫學發(fā)病機制提供線索。
　　第一部分：潰瘍性結腸炎患者中TCN2基因多態(tài)性及血清Hcy、葉酸和VitB12水平分析。
　　方法：
　　收集397例UC患者和574名健康對照者

4、，采用改良多重高溫連接酶檢測反應(iMLDR)技術檢測 TCN2(rs1801198和 rs9606756)2種單核苷酸多態(tài)性(SNP)。從中隨機選取128例UC患者和138名年齡、性別相匹配的健康對照者，采用循環(huán)酶法(ECA)檢測血清Hcy水平，化學發(fā)光免疫法(CLIA)檢測血清葉酸和VitB12水平。
　　結果：
　　與對照組相比較，UC組中上述2個SNP位點的突變等位基因和基因型頻率無統(tǒng)計學差異(P均＞0.05)。分層

5、分析發(fā)現(xiàn)，中重度UC患者中(rs1801198)的突變等位基因(G)和基因型(CG+GG)頻率高于對照組(68.84％比56.10%, P＜0.001;90.95%比82.40%, P=0.005)；(rs9606756)的突變等位基因(G)和基因型(AG+GG)頻率亦高于對照組(2.51%比1.05%, P=0.039;5.03%比2.09%, P=0.038)。采用Haploview4.2軟件進行連鎖不平衡和單倍型分析，結果顯示(r

6、s1801198)和(rs9606756)彼此連鎖(D'=0.821, r2=0.007)，但所構建的4種單倍型的頻率在UC組和對照組之間比較均無統(tǒng)計學差異(P均＞0.05)。UC組中Hcy平均水平高于對照組[(10.78±3.33)比(9.91±2.88)μmol/L, P=0.024]，而葉酸和VitB12平均水平低于對照組[(6.81±3.06)比(8.17±2.58) ng/mL, P＜0.001;(408.66±185.00)

7、比(457.42±206.47) pg/mL, P=0.044]。UC組中高同型半胱氨酸血癥(>15.0μmol/L, HHcy)、葉酸缺乏(<4.0 ng/mL)和VitB12缺乏(<203.0 pg/mL)所占比例均高于對照組(14.06%比4.35%, P=0.006;20.31%比5.07%, P＜0.001;14.06%比5.07%, P=0.012)。多元線性回歸分析提示UC組中Hcy水平與VitB12、紅細胞計數(shù)和白蛋白呈

8、負相關(β=-0.404, P＜0.001;β=-0.314, P＜0.001;β=-0.245, P=0.003)，與Mayo評分和白細胞計數(shù)呈正相關(β=0.169, P=0.036;β=0.266, P=0.001)。Logistic回歸分析顯示HHcy和葉酸缺乏是UC的獨立危險因素(OR=3.850, P=0.023;OR=4.611, P=0.001)。
　　小結：
　　TCN2(rs1801198和rs96067

9、56)基因多態(tài)性及血清Hcy、葉酸和VitB12水平與UC相關。浙江籍漢族UC患者中普遍存在HHcy、葉酸缺乏和VitB12缺乏，并且HHcy和葉酸缺乏是UC的獨立危險因素。
　　第二部分：TCN2基因多態(tài)性及血清Hcy、葉酸和VitB12水平與克羅恩病的關系。
　　方法：
　　在307例CD患者和574名健康對照者中，采用iMLDR技術檢測TCN2(rs1801198和rs9606756)基因多態(tài)性。從中隨機選取88

10、例CD患者和138名性別、年齡相匹配的健康對照者，采用ECA檢測血清Hcy水平，CLIA檢測血清葉酸和VitB12水平。
　　結果：
　　CD組中(rs1801198)的突變等位基因(G)和基因型(CG+GG)頻率與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)，但狹窄型CD患者中該SNP的突變等位基因(G)和基因型(CG+GG)頻率高于對照組(65.75%比56.10%, P=0.027;93.15%比82.40%, P=0

11、.025)。CD組中(rs9606756)的突變等位基因(G)和基因型(AG+GG)頻率高于對照組(2.44%比1.05%, P=0.027;4.89%比2.09%, P=0.026)，狹窄型CD患者和回結腸型CD患者中(rs9606756)的突變等位基因(G)和基因型(AG+GG)頻率亦均高于對照組(狹窄型CD/對照組:4.79%比1.05%, P=0.001;9.59%比2.09%, P=0.001;回結腸型CD/對照組:3.18%

12、比1.05%, P=0.018;6.36%比2.09%, P=0.018)。TCN2(rs1801198和rs9606756)存在弱連鎖不平衡(D'=0.735, r2=0.006)，CD組中(GG)單倍型頻率高于對照組(2.23%比0.81%, P=0.012)。CD組中Hcy平均水平高于對照組[(11.51±6.07)比(9.91±2.88)μmol/L, P=0.023]，而葉酸和VitB12平均水平低于對照組[(6.08±2.9

13、0)比(8.17±2.58) ng/mL, P＜0.001;(319.30±126.87)比(457.42±206.47) pg/mL, P＜0.001]。CD組中HHcy、葉酸缺乏和VitB12缺乏的比例均高于對照組(18.18%比4.35%, P=0.001;27.27%比5.07%, P＜0.001;31.82%比5.07%, P＜0.001)。多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)CD患者中Hcy水平與葉酸呈獨立負相關(β=-0.494, P＜0

14、.001)，與中性粒細胞百分比呈獨立正相關(β=0.294, P=0.004)。Logistic回歸分析提示葉酸缺乏和 VitB12缺乏為 CD的獨立危險因素(OR=5.415, P＜0.001;OR=7.112, P＜0.001)。
　　小結：
　　TCN2(rs1801198)突變可能影響狹窄型CD的發(fā)病風險，(rs9606756)可能與CD易感性相關。浙江籍漢族CD患者中普遍存在HHcy、葉酸缺乏和VitB12缺乏在，