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文檔簡介
1、研究背景:隨著人們生活方式和飲食習慣的改變,缺血性腦卒中已經(jīng)成為成年人致死致殘以及神經(jīng)功能損傷的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計缺血性腦卒中占腦卒中的比例已超過80%,然而現(xiàn)在臨床仍然缺乏有效的治療手段。成體神經(jīng)干細胞替代性治療方法在神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)治療方面將有廣闊的應(yīng)用前景。但是,成體神經(jīng)干細胞替代療法應(yīng)用于缺血性腦卒中臨床治療的最大障礙是在缺血半暗帶區(qū)缺血缺氧的微環(huán)境對成體神經(jīng)干細胞活性和功能的損傷。所以,能否找到一種保護缺血半暗帶區(qū)成體
2、神經(jīng)干細胞免受缺血缺氧性損傷的方法是成體神經(jīng)干細胞替代療法臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。
目的:通過建立成體神經(jīng)干細胞體外缺血缺氧性損傷模型,探討mfat-1基因是否對氯化鈷誘導(dǎo)的成體神經(jīng)干細胞缺氧性損傷具有保護作用,同時進一步研究其內(nèi)在機制,為成體神經(jīng)干細胞替代療法的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
方法:mfat-1轉(zhuǎn)基因小鼠和其同窩陰性小鼠飼養(yǎng)至8-12周齡,基因型鑒定完成后,無菌環(huán)境下提取兩組小鼠大腦Subventricularzone
3、(SVZ)區(qū)神經(jīng)干細胞,培養(yǎng)至第三代用于以下實驗。細胞免疫組化鑒定神經(jīng)干細胞標志蛋白Nestin,通過氣相色譜技術(shù)分別測定mfat-1組及同窩陰性組鼠腦和神經(jīng)干細胞n-3/n-6的比值。通過氯化鈷誘導(dǎo)體外構(gòu)建成體神經(jīng)干細胞缺血缺氧模型;通過測定兩組細胞的細胞活性,細胞凋亡率和細胞增殖率來研究mfat-1基因?qū)Τ审w神經(jīng)干細胞體外缺氧性損傷的保護作用。為了進一步探究mfat-1基因的作用機制,我們分別測定了兩組細胞活性氧水平以及谷胱甘肽表達
4、水平,確定了mfat-1基因的保護機制是通過促進抗氧化應(yīng)激損傷來完成的。我們選取了抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵信號通路Nrf2/ARE信號通路,分別檢測了Nrf2及下游基因HO-1、NQO-1、GCLC mRNA表達水平以及蛋白表達水平。
結(jié)果:mfat-1基因可以增強氯化鈷誘導(dǎo)的缺氧性損傷中成體神經(jīng)干細胞的細胞活性,與此同時抑制氯化鈷介導(dǎo)的成體神經(jīng)干細胞的凋亡。通過BrdU標記實驗表明,在氯化鈷誘導(dǎo)的體外缺氧損傷模型中,mfat-1組的
5、細胞增殖率明顯高于同窩陰性對照組。活性氧水平以及細胞谷胱甘肽表達水平檢測結(jié)果顯示mfat-1組細胞活性氧水平明顯低于同窩陰性對照組,同時谷胱甘肽表達量明顯高于同窩陰性對照組。實時定量PCR檢測結(jié)果顯示Nrf2及其下游基因的mRNA的表達量均高于同窩陰性對照組。Western blot檢測結(jié)果顯示Nrf2及其下游基因HO-1、NQO-1、GCLC的蛋白表達量均高于對照組。
結(jié)論:fat-1基因?qū)β然捊閷?dǎo)的成體神經(jīng)干細胞缺氧性損
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