酒精中毒對氯化鈷誘導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞缺氧損傷的影響.pdf

1、目的:探討酒精中毒對氯化鈷誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞SK-N-SH細(xì)胞缺氧損傷的影響。
　　方法:將SK-N-SH細(xì)胞分成4組，依次為空白組、氯化鈷組、低濃度酒精組、高濃度酒精組?？瞻捉M未作任何處理;氯化鈷組用含250μmol/L氯化鈷的培養(yǎng)液處理6h;酒精組分別用含酒精(300mg/L、900mg/L)的培養(yǎng)液預(yù)處理1h，加入含250μmol/L氯化鈷的培養(yǎng)液處理6h;4組細(xì)胞均選自對數(shù)生長期，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)(37℃、5％ CO2);倒置

2、顯微鏡下觀察4組SK-N-SH細(xì)胞形態(tài)學(xué);MTT檢測4組細(xì)胞活力;Hoechst染色法測定4組細(xì)胞凋亡數(shù)目;Western blot法測定4組細(xì)胞Bax、Bcl-2、HIF-1α等蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)鏡下觀察SK-N-SH細(xì)胞形態(tài)，氯化鈷組和酒精組SK-N-SH細(xì)胞神經(jīng)突出數(shù)目減少，摻雜死亡細(xì)胞;酒精組SK-N-SH細(xì)胞神經(jīng)突出減少顯著，死亡細(xì)胞數(shù)目增多;高濃度酒精組SK-N-SH細(xì)胞神經(jīng)突出減少明顯，死亡細(xì)胞數(shù)目增多。

3、
　　(2) MTT檢測結(jié)果顯示:與空白對照組比較，氯化鈷組SK-N-SH細(xì)胞存活率明顯降低（P＜0.001）;與氯化鈷組比較，低、高濃度酒精組SK-N-SH細(xì)胞存活率均明顯降低（P＜0.01或P＜0.001）;與低濃度酒精組比較，高濃度酒精組細(xì)胞存活率明顯降低(P＜0.001)。
　　(3) Hoechst法，倒置顯微鏡下觀察氯化鈷組SK-N-SH細(xì)胞核固縮，呈現(xiàn)為藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞數(shù)目增加;酒精組SK-N-SH細(xì)胞核固縮

4、，藍(lán)色熒光數(shù)目增加，凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯增加;高濃度酒精組細(xì)胞核固縮，藍(lán)色熒光數(shù)目增加，凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯增加。
　　(4) Western blot結(jié)果顯示:與空白組比較，氯化鈷組和酒精組Bax、HIF-1α蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.001)，氯化鈷組Bcl-2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.001），低、高濃度酒精組Bcl-2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.001或P＜0.01）;與氯化鈷組比較，酒精組Bax、HIF-1α表達(dá)上調(diào)(P＜0.00