自噬對(duì)乳化異氟烷誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞損傷的調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：探討與 JNK通路相關(guān)的全身麻醉藥物乳化異氟烷（EI）對(duì)原代培養(yǎng)的 SD大鼠胚胎神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響以及自噬調(diào)控在此種細(xì)胞增殖影響中發(fā)揮的效應(yīng)。
　　方法：購(gòu)得從妊娠期第14天的SD大鼠皮層中分離出來的原代胚胎神經(jīng)干細(xì)胞，種植于96孔板后置于溫箱中培養(yǎng)，傳至3-5代后，未分化表型保持在85％以上，1.建立體外培養(yǎng)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞接受乳化異氟烷處理的模型：步驟（1）同批細(xì)胞隨機(jī)分為6組（n=8),正常組（N組），脂肪乳組（F組）

2、，乳化異氟烷處理組（EI1組，EI2組，EI3組，EI濃度分別為8.12mM,9.80mM,12.04mM），20uM SP600125+9.80mM EI組(EI2SP組）。細(xì)胞處理12小時(shí)后，立即采用噻唑蘭（MTT）法分別檢測(cè)6組胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞活力；分別檢測(cè)凋亡細(xì)胞的比率以及JNK和Caspase3的蛋白表達(dá)量；步驟（2）選取步驟（1）中的N組、F組、EI2組，分別在6,12,24小時(shí)使用GFP-LC3B轉(zhuǎn)染技術(shù)檢測(cè)自噬現(xiàn)象的

3、發(fā)生，檢測(cè)Beclin-1和LC3B蛋白表達(dá)量的變化。2.建立自噬干擾下乳化異氟烷處理后的細(xì)胞模型：分為5組(n=8),正常組(N組)，脂肪乳組(F組），EI2組，10mM3-MA+EI2組(EI2M組)，25nM BAF+EI2組(EI2B組)。12小時(shí)穩(wěn)定培養(yǎng)后，立即采用MTT法檢測(cè)5組細(xì)胞胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞活力；分別檢測(cè)凋亡細(xì)胞的比率的變化。
　　結(jié)果：1.（1）與N組比較，F(xiàn)組各項(xiàng)指標(biāo)無明顯差異，EI組細(xì)胞增殖的抑制率以

4、及細(xì)胞凋亡率明顯升高（P<0.001)，EI組明顯上調(diào)Caspase3的表達(dá)量(P<0.05)，EI組內(nèi)三個(gè)濃度之間比較，細(xì)胞增殖的抑制率（P<0.01)，凋亡率以及Caspase3的蛋白表達(dá)水平(P<0.05)之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與EI2組比較，EI2SP組細(xì)胞增殖的抑制率明顯下降(P<0.05)，EI2SP組細(xì)胞的凋亡率明顯降低(P<0.001)，EI2SP組明顯下調(diào)Caspase3的表達(dá)量(P<0.05)。（2）選取的N組、

5、F組、EI2組在6，12,24小時(shí)分別觀察檢測(cè)的結(jié)果顯示，三個(gè)時(shí)間段內(nèi)，與N組和F組比較，EI2組中細(xì)胞 LC3B和Beclin-1的蛋白表達(dá)水平顯著上升(P<0.05)，GFP-LC3B的熒光標(biāo)記量明顯上升（P<0.001)。2.與N組，F(xiàn)組比較，EI2組細(xì)胞增殖的抑制率明顯升高（P<0.01），EI2組中細(xì)胞的凋亡率顯著上升（P<0.001)；與 EI2組比較，EI2M組細(xì)胞增殖的抑制率明顯升高（P<0.01），細(xì)胞的凋亡率顯著上調(diào)