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文檔簡介
1、背景:乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,且有65%-75%的乳腺癌患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)IL-11/IL-11Rα信號通路參與乳腺癌骨轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展,IL-11Rα能作為乳腺癌、骨肉瘤等受體顯像的潛在靶點,其在乳腺癌顯像及治療的應(yīng)用值得進(jìn)一步探索。
目的:本實驗通過評估IL-11類似物環(huán)九肽CGRRAGGSC對IL-11Rα的靶向性,并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建放射性核素標(biāo)記CGRRAGGSC探針進(jìn)行乳腺癌模型鼠顯像及體外對乳腺癌細(xì)胞抑制
2、作用的研究。
方法:采用蛋白印跡(Western blot)檢測乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231、MCF-7和BT549)和正常乳腺細(xì)胞MCF-10A中IL-11Rα的表達(dá)。體外細(xì)胞免疫熒光觀察冷CGRRAGGSC或抗IL-11Rα抗體處理前后,CGRRAGGSC、對照環(huán)肽CGSPGWVRC和酪氨酸(Tyr)或螯合劑(DTPA)修飾后的CGRRAGGSC對各乳腺癌細(xì)胞的結(jié)合情況。近紅外線顯像評估CGRRAGGSC在乳腺癌MCF
3、-7模型鼠體內(nèi)對IL-11Rα的靶向特異性情況。通過氯化亞錫還原法標(biāo)記環(huán)九肽CGRRAGGSC獲得標(biāo)記產(chǎn)物99mTc-DTPA-CGRRAGGSC,紙層析檢測標(biāo)記率及穩(wěn)定性,以乳腺癌皮下移植瘤模型鼠進(jìn)行SPECT成像研究。通過氯氨T法標(biāo)記CGRRAGGSC獲得131I-CGRRAGGSC,薄層層析檢測標(biāo)記率及穩(wěn)定性,行噻唑藍(lán)(MTT)法、Transwell、劃痕實驗及Western blot檢測131I-CGRRAGGSC對乳腺癌細(xì)胞的
4、抑制作用及處理前后細(xì)胞內(nèi)IL-11Rα和STAT3、p-STAT3蛋白的表達(dá)變化。
結(jié)果:IL-11Rα在本研究的乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)高于正常乳腺細(xì)胞MCF-10A。CGRRAGGSC、Tyr-CGRRAGGSC和DTPA-CGRRAGGSC都能與各乳腺癌發(fā)生特異性結(jié)合,而對照肽CGSPGWVRC幾乎不結(jié)合;用冷CGRRAGGSC或抗IL-11Rα抗體處理后,CGRRAGGSC的結(jié)合能力明顯減弱。近紅外顯像示注射Cy7-CGRR
5、AGGSC后腫瘤部位的熒光信號明顯高于其它器官或組織,而注射Cy7組腫瘤的熒光信號與正常器官或組織相似。成功制備了131I-CGRRAGGSC和99mTc-DTPA-CGRRAGGSC,兩者的標(biāo)記率都達(dá)95%以上,并且在37℃放置12h后的放射性化學(xué)純度都在90%以上。SPECT顯像示瘤體間質(zhì)內(nèi)給藥后,99mTc-DTPA-CGRRAGGSC在荷瘤鼠瘤體內(nèi)的滯留時間長且放射性高。131I-CGRRAGGSC處理后,乳腺癌細(xì)胞的增殖及遷移
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