抗凝蛋白及血管性血友病因子檢測結果一致化相關問題研究.pdf

1、目的:
　　目前國內部分實驗室AT、PC和PS活性以及vWF抗原和活性檢測結果的準確性和可比性較差，需要研究結果一致化的方法與評價標準，幫助實施質量改進。本課題對不同檢測系統(tǒng)之間結果的可比性進行了研究;對衛(wèi)生部臨床檢驗中心研制的AT、PC和PS活性檢測標準物質和vWF檢測標準物質進行了評價和定值，并將標準物質試應用于室內質控和室間質評;嘗試探討抗凝蛋白活性檢測不同校準物的校準效果，為促進其檢測結果一致化及實施質量改進提供依據(jù)。

2、r>　　方法:
　　1.檢測現(xiàn)狀的全國性調查:通過問卷和質控物檢測調查，收集并分析國內開展AT、PC和PS活性檢測的相關信息，包括檢測方式和標本量、所用儀器和與試劑、性能驗證與定標、室內質控、參考區(qū)間設置等，明確檢測現(xiàn)狀和存在問題。
　　2.抗凝蛋白活性檢測結果一致化相關問題研究:①檢測系統(tǒng)性能驗證:參照行業(yè)標準、國內外指南文件和廠家的要求，明確性能驗證的方法和指標，對Sysmex CS-5100血凝儀AT、PC和PS活性檢

3、測的性能（包括批內精密度、日間精密度、準確度、正確度和線性）進行驗證。②主流檢測系統(tǒng)間結果可比性研究:依據(jù)EP9-A3對Sysmex、Stago和IL3種檢測系統(tǒng)AT、PC和PS活性檢測結果的可比性進行評價，探討推進質量改進的方向。③標準物質的制備與評價:制備3個批號的標準物質，依據(jù)ISO Guide35《標準樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法》，CNAS-GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》和CLSI EP-30《參考物質定值和互

4、通性評價指南》的要求，對標準物質的均勻性、穩(wěn)定性和互通性進行評價;依據(jù)ISO Guide35采用多家實驗室聯(lián)合定值的方式，以NIBSC凝血標準品LOT4為溯源標準，使用3種檢測系統(tǒng)（Sysmex、Stago和IL）對標準物質進行定值。④不同校準物校準效果評價:分別用廠家配套校準品、LOT4和自制高濃度水平標準物質對檢測系統(tǒng)進行校準，比較不同校準條件下系統(tǒng)間檢測結果可比性的變化情況，探討使用標準物質改進系統(tǒng)間結果可比性的可能性。⑤標準物質

5、室內質控試應用:將標準物質應用于室內質控，計算累積變異系數(shù)(CV)，并與廠家配套質控品的檢測結果進行比較，評價其室內質控應用效果。
　　3.血管性血友病因子檢測結果一致化相關問題研究:①在前期均勻性評價良好的基礎上，對衛(wèi)生部臨床檢驗中心研制的vWF標準物質抗原和活性檢測進行穩(wěn)定性評價。②結果一致化相關問題研究:對Stago和IL兩種檢測系統(tǒng)vWF抗原檢測結果的可比性進行分析;對標準物質的互通性進行評價;采用多家實驗室聯(lián)合定值的方式

6、，以NIBSC凝血標準品LOT4為溯源標準，使用Stago和IL兩種檢測系統(tǒng)對標準物質進行定值。
　　結果:
　　1.問卷和質控物檢測調查:235家實驗室回報了問卷，其中開展AT、PC和PS活性檢測的實驗室分別為194、63和50家。所用儀器和試劑以進口品牌為主（占96％以上），最常用的檢測系統(tǒng)為Sysmex、Stago和IL儀器及其配套試劑，儀器和試劑配套率均在94％以上。對于AT、PC和PS活性檢測，分別有30.4％、3

7、3.3％和34.0％實驗室未對所用儀器進行性能驗證，8.8％、7.9％和14.0％實驗室未在更換試劑批號時進行定標，11.3％、17.5％和16.0％實驗室未常規(guī)開展室內質控，34.9％、26.9％和21.4％實驗室僅進行單個濃度水平的質控。分別有4.1％、1.6％和2.0％實驗室按年齡分組設置AT、PC和PS活性參考區(qū)間，16.0％實驗室按性別分組設置PS活性參考區(qū)間。質控物檢測結果顯示，正常水平質控物AT、PC和PS活性檢測結果的C

8、V范圍分別為5.7％～12.9％、4.2％～7.7％和18.4％～33.1％;異常水平質控物的CV范圍分別為13.3％～38.3％、6.1％～14.4％和31.5％～34.5％。使用不同評價標準的及格率存在差異，各項目應根據(jù)濃度水平分別選擇合適的評價標準。
　　2.抗凝蛋白活性檢測結果一致化相關問題研究:①明確了Sysmex CS-5100血凝儀AT、PC和PS活性檢測性能驗證的方法和指標，其批內精密度、日間精密度、準確度、線性和

9、正確度驗證均符合要求。②AT和PC活性檢測在Sysmex、Stago和IL檢測系統(tǒng)之間的相關性較好(r2＞0.95);PS活性檢測IL-Stago兩系統(tǒng)間、IL-Sysmex兩系統(tǒng)間檢測結果的r2＞0.90，相關性可接受，Stago-Sysmex兩系統(tǒng)間檢測結果的r2＜0.90，相關性略差。AT、PC和PS活性檢測在Sysmex、Stago和IL三種系統(tǒng)間檢測結果的可比性分別可達到BV-TEa最低、BV-TEa最優(yōu)和RCPA標準的要求。

10、③3個批號抗凝蛋白活性標準物質（AT/PC/PS201701～201703）的均勻性評價單因素方差分析結果P值均＞0.05，表明均勻性良好;AT、PC和PS活性瓶間均勻性不確定度(ubb)分別為0.71％～1.27％、0.83％～1.20％和0.91％～3.74％。將標準物質置于-80℃條件下保存，在觀察期8周內AT、PC和PS活性檢測結果無趨勢性變化，表明標準物質穩(wěn)定性良好;其長期穩(wěn)定性不確定度（ults）分別為1.06％～1.78％

11、、1.57～2.97％和1.45％～7.32％。各批號標準物質在Sysmex、Stago和IL三種檢測系統(tǒng)間具有互通性。以5家實驗室的檢測結果均值為定值結果，定值過程不確定度（uchar）分別為1.89％～2.38％、1.96％～3.13％和1.88％～7.57％。AT201701～AT201703批號標準物質的定值結果分別為:（92.5±4.8）％、（78.9±3.8）％和（33.4±5.1）％;PC201701～PC201703批號

12、標準物質的定值結果分別為:(111.4±6.3)％、(85.3±6.4)％和(41.7±3.9)％;PS201701～PS201703批號標準物質的定值結果分別為:(98.9±15.1)％、(65.7±9.0)％和(31.2±3.8)％。④使用廠家配套校準品、LOT4和自制標準物質分別校準后，AT活性檢測在Stago和Sysmex檢測系統(tǒng)間的可比性分別達到BV-TEa最低、BV-TEa合適和BV-TEa合適水平，PC活性檢測可比性均達到

13、BV-TEa最優(yōu)水平，PS活性檢測可比性分別達到BV-TEa合適、BV-TEa合適和RCPA的評價標準。⑤室內質控試應用結果顯示，AT、PC和PS活性檢測標準物質和相近濃度水平的商品質控物的檢測結果CV分布范圍分別為2.5～7.6％和3.0～8.3％、2.3～2.6％和2.0～4.0％、5.8～7.1％和5.9～9.6％;均小于廠家規(guī)定的批間不精密度。
　　3.血管性血友病因子檢測結果一致化相關問題研究:①vWF∶Ag的檢測結果在

14、26個月內無趨勢性變化，vWF∶A的檢測結果在11個月內無趨勢性變化，各批號的長期穩(wěn)定性不確定度(ults)分別為0.70％～1.78％和2.16％～4.56％。②IL-Stago系統(tǒng)間的結果可比性可達到接受BV-TEa合適的要求。LOT4和各批號標準物質在IL和Stago系統(tǒng)間具有互通性。vWF201501～201505批號標準物質抗原檢測的定值結果分別為(138±11)％、(89±4)％、(54±3)％、(21±2)％和(12±2)

15、％。
　　結論:
　　1.調查結果顯示部分實驗室在抗凝蛋白活性檢測的性能驗證和質量控制等方面操作不規(guī)范;不同實驗室間檢測結果可比性較差，需通過制訂相關技術要求、加強人員培訓及開展全國室間質量評價等方式實施質量改進。
　　2.①以Sysmex CS-5100檢測系統(tǒng)為代表，對性能驗證方法和評價指標開展研究，性能驗證方案可為制訂相關技術要求和其他實驗室開展性能驗證提供參考。②AT和PC活性在Sysmex、Stago和IL系

16、統(tǒng)的相關性較好，PS活性稍差;可比性可接受。③AT、PC和PS活性標準物質的均勻性和穩(wěn)定性良好，在3種主流檢測系統(tǒng)間具有互通性，并完成了5家實驗室包含3種主流檢測系統(tǒng)的聯(lián)合定值。④凝血標準品LOT4和自制標準物質可用于校準，校準后系統(tǒng)間結果可比性可滿足評價標準的要求。⑤自制標準物質室內質控累積CV小于或接近與商品質控物CV，表明其可以應用于日常室內質控。
　　3.血管性血友病因子標準物質（抗原和活性）穩(wěn)定性良好，在2個主流檢測系統(tǒng)