抗凝蛋白及血管性血友病因子檢測(cè)結(jié)果一致化相關(guān)問題研究.pdf

1、目的:
　　目前國(guó)內(nèi)部分實(shí)驗(yàn)室AT、PC和PS活性以及vWF抗原和活性檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性較差，需要研究結(jié)果一致化的方法與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，幫助實(shí)施質(zhì)量改進(jìn)。本課題對(duì)不同檢測(cè)系統(tǒng)之間結(jié)果的可比性進(jìn)行了研究;對(duì)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心研制的AT、PC和PS活性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和vWF檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了評(píng)價(jià)和定值，并將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)試應(yīng)用于室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng);嘗試探討抗凝蛋白活性檢測(cè)不同校準(zhǔn)物的校準(zhǔn)效果，為促進(jìn)其檢測(cè)結(jié)果一致化及實(shí)施質(zhì)量改進(jìn)提供依據(jù)。

2、r>　　方法:
　　1.檢測(cè)現(xiàn)狀的全國(guó)性調(diào)查:通過問卷和質(zhì)控物檢測(cè)調(diào)查，收集并分析國(guó)內(nèi)開展AT、PC和PS活性檢測(cè)的相關(guān)信息，包括檢測(cè)方式和標(biāo)本量、所用儀器和與試劑、性能驗(yàn)證與定標(biāo)、室內(nèi)質(zhì)控、參考區(qū)間設(shè)置等，明確檢測(cè)現(xiàn)狀和存在問題。
　　2.抗凝蛋白活性檢測(cè)結(jié)果一致化相關(guān)問題研究:①檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證:參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)內(nèi)外指南文件和廠家的要求，明確性能驗(yàn)證的方法和指標(biāo)，對(duì)Sysmex CS-5100血凝儀AT、PC和PS活性檢

3、測(cè)的性能（包括批內(nèi)精密度、日間精密度、準(zhǔn)確度、正確度和線性）進(jìn)行驗(yàn)證。②主流檢測(cè)系統(tǒng)間結(jié)果可比性研究:依據(jù)EP9-A3對(duì)Sysmex、Stago和IL3種檢測(cè)系統(tǒng)AT、PC和PS活性檢測(cè)結(jié)果的可比性進(jìn)行評(píng)價(jià)，探討推進(jìn)質(zhì)量改進(jìn)的方向。③標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備與評(píng)價(jià):制備3個(gè)批號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，依據(jù)ISO Guide35《標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》，CNAS-GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》和CLSI EP-30《參考物質(zhì)定值和互

4、通性評(píng)價(jià)指南》的要求，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性、穩(wěn)定性和互通性進(jìn)行評(píng)價(jià);依據(jù)ISO Guide35采用多家實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合定值的方式，以NIBSC凝血標(biāo)準(zhǔn)品LOT4為溯源標(biāo)準(zhǔn)，使用3種檢測(cè)系統(tǒng)（Sysmex、Stago和IL）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值。④不同校準(zhǔn)物校準(zhǔn)效果評(píng)價(jià):分別用廠家配套校準(zhǔn)品、LOT4和自制高濃度水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)，比較不同校準(zhǔn)條件下系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果可比性的變化情況，探討使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)改進(jìn)系統(tǒng)間結(jié)果可比性的可能性。⑤標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

5、室內(nèi)質(zhì)控試應(yīng)用:將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)用于室內(nèi)質(zhì)控，計(jì)算累積變異系數(shù)(CV)，并與廠家配套質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)其室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)用效果。
　　3.血管性血友病因子檢測(cè)結(jié)果一致化相關(guān)問題研究:①在前期均勻性評(píng)價(jià)良好的基礎(chǔ)上，對(duì)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心研制的vWF標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)抗原和活性檢測(cè)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。②結(jié)果一致化相關(guān)問題研究:對(duì)Stago和IL兩種檢測(cè)系統(tǒng)vWF抗原檢測(cè)結(jié)果的可比性進(jìn)行分析;對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的互通性進(jìn)行評(píng)價(jià);采用多家實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合定值的方式

6、，以NIBSC凝血標(biāo)準(zhǔn)品LOT4為溯源標(biāo)準(zhǔn)，使用Stago和IL兩種檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值。
　　結(jié)果:
　　1.問卷和質(zhì)控物檢測(cè)調(diào)查:235家實(shí)驗(yàn)室回報(bào)了問卷，其中開展AT、PC和PS活性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室分別為194、63和50家。所用儀器和試劑以進(jìn)口品牌為主（占96％以上），最常用的檢測(cè)系統(tǒng)為Sysmex、Stago和IL儀器及其配套試劑，儀器和試劑配套率均在94％以上。對(duì)于AT、PC和PS活性檢測(cè)，分別有30.4％、3

7、3.3％和34.0％實(shí)驗(yàn)室未對(duì)所用儀器進(jìn)行性能驗(yàn)證，8.8％、7.9％和14.0％實(shí)驗(yàn)室未在更換試劑批號(hào)時(shí)進(jìn)行定標(biāo)，11.3％、17.5％和16.0％實(shí)驗(yàn)室未常規(guī)開展室內(nèi)質(zhì)控，34.9％、26.9％和21.4％實(shí)驗(yàn)室僅進(jìn)行單個(gè)濃度水平的質(zhì)控。分別有4.1％、1.6％和2.0％實(shí)驗(yàn)室按年齡分組設(shè)置AT、PC和PS活性參考區(qū)間，16.0％實(shí)驗(yàn)室按性別分組設(shè)置PS活性參考區(qū)間。質(zhì)控物檢測(cè)結(jié)果顯示，正常水平質(zhì)控物AT、PC和PS活性檢測(cè)結(jié)果的C

8、V范圍分別為5.7％～12.9％、4.2％～7.7％和18.4％～33.1％;異常水平質(zhì)控物的CV范圍分別為13.3％～38.3％、6.1％～14.4％和31.5％～34.5％。使用不同評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的及格率存在差異，各項(xiàng)目應(yīng)根據(jù)濃度水平分別選擇合適的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。
　　2.抗凝蛋白活性檢測(cè)結(jié)果一致化相關(guān)問題研究:①明確了Sysmex CS-5100血凝儀AT、PC和PS活性檢測(cè)性能驗(yàn)證的方法和指標(biāo)，其批內(nèi)精密度、日間精密度、準(zhǔn)確度、線性和

9、正確度驗(yàn)證均符合要求。②AT和PC活性檢測(cè)在Sysmex、Stago和IL檢測(cè)系統(tǒng)之間的相關(guān)性較好(r2＞0.95);PS活性檢測(cè)IL-Stago兩系統(tǒng)間、IL-Sysmex兩系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的r2＞0.90，相關(guān)性可接受，Stago-Sysmex兩系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的r2＜0.90，相關(guān)性略差。AT、PC和PS活性檢測(cè)在Sysmex、Stago和IL三種系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的可比性分別可達(dá)到BV-TEa最低、BV-TEa最優(yōu)和RCPA標(biāo)準(zhǔn)的要求。

10、③3個(gè)批號(hào)抗凝蛋白活性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（AT/PC/PS201701～201703）的均勻性評(píng)價(jià)單因素方差分析結(jié)果P值均＞0.05，表明均勻性良好;AT、PC和PS活性瓶間均勻性不確定度(ubb)分別為0.71％～1.27％、0.83％～1.20％和0.91％～3.74％。將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)置于-80℃條件下保存，在觀察期8周內(nèi)AT、PC和PS活性檢測(cè)結(jié)果無(wú)趨勢(shì)性變化，表明標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)穩(wěn)定性良好;其長(zhǎng)期穩(wěn)定性不確定度（ults）分別為1.06％～1.78％

11、、1.57～2.97％和1.45％～7.32％。各批號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在Sysmex、Stago和IL三種檢測(cè)系統(tǒng)間具有互通性。以5家實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果均值為定值結(jié)果，定值過程不確定度（uchar）分別為1.89％～2.38％、1.96％～3.13％和1.88％～7.57％。AT201701～AT201703批號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果分別為:（92.5±4.8）％、（78.9±3.8）％和（33.4±5.1）％;PC201701～PC201703批號(hào)

12、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果分別為:(111.4±6.3)％、(85.3±6.4)％和(41.7±3.9)％;PS201701～PS201703批號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果分別為:(98.9±15.1)％、(65.7±9.0)％和(31.2±3.8)％。④使用廠家配套校準(zhǔn)品、LOT4和自制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別校準(zhǔn)后，AT活性檢測(cè)在Stago和Sysmex檢測(cè)系統(tǒng)間的可比性分別達(dá)到BV-TEa最低、BV-TEa合適和BV-TEa合適水平，PC活性檢測(cè)可比性均達(dá)到

13、BV-TEa最優(yōu)水平，PS活性檢測(cè)可比性分別達(dá)到BV-TEa合適、BV-TEa合適和RCPA的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。⑤室內(nèi)質(zhì)控試應(yīng)用結(jié)果顯示，AT、PC和PS活性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和相近濃度水平的商品質(zhì)控物的檢測(cè)結(jié)果CV分布范圍分別為2.5～7.6％和3.0～8.3％、2.3～2.6％和2.0～4.0％、5.8～7.1％和5.9～9.6％;均小于廠家規(guī)定的批間不精密度。
　　3.血管性血友病因子檢測(cè)結(jié)果一致化相關(guān)問題研究:①vWF∶Ag的檢測(cè)結(jié)果在

14、26個(gè)月內(nèi)無(wú)趨勢(shì)性變化，vWF∶A的檢測(cè)結(jié)果在11個(gè)月內(nèi)無(wú)趨勢(shì)性變化，各批號(hào)的長(zhǎng)期穩(wěn)定性不確定度(ults)分別為0.70％～1.78％和2.16％～4.56％。②IL-Stago系統(tǒng)間的結(jié)果可比性可達(dá)到接受BV-TEa合適的要求。LOT4和各批號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在IL和Stago系統(tǒng)間具有互通性。vWF201501～201505批號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)抗原檢測(cè)的定值結(jié)果分別為(138±11)％、(89±4)％、(54±3)％、(21±2)％和(12±2)

15、％。
　　結(jié)論:
　　1.調(diào)查結(jié)果顯示部分實(shí)驗(yàn)室在抗凝蛋白活性檢測(cè)的性能驗(yàn)證和質(zhì)量控制等方面操作不規(guī)范;不同實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果可比性較差，需通過制訂相關(guān)技術(shù)要求、加強(qiáng)人員培訓(xùn)及開展全國(guó)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)等方式實(shí)施質(zhì)量改進(jìn)。
　　2.①以Sysmex CS-5100檢測(cè)系統(tǒng)為代表，對(duì)性能驗(yàn)證方法和評(píng)價(jià)指標(biāo)開展研究，性能驗(yàn)證方案可為制訂相關(guān)技術(shù)要求和其他實(shí)驗(yàn)室開展性能驗(yàn)證提供參考。②AT和PC活性在Sysmex、Stago和IL系

16、統(tǒng)的相關(guān)性較好，PS活性稍差;可比性可接受。③AT、PC和PS活性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性和穩(wěn)定性良好，在3種主流檢測(cè)系統(tǒng)間具有互通性，并完成了5家實(shí)驗(yàn)室包含3種主流檢測(cè)系統(tǒng)的聯(lián)合定值。④凝血標(biāo)準(zhǔn)品LOT4和自制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于校準(zhǔn)，校準(zhǔn)后系統(tǒng)間結(jié)果可比性可滿足評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的要求。⑤自制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)室內(nèi)質(zhì)控累積CV小于或接近與商品質(zhì)控物CV，表明其可以應(yīng)用于日常室內(nèi)質(zhì)控。
　　3.血管性血友病因子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（抗原和活性）穩(wěn)定性良好，在2個(gè)主流檢測(cè)系統(tǒng)