NDMA誘導(dǎo)大鼠肝癌模型及長(zhǎng)期臘腸攝入對(duì)大鼠消化系統(tǒng)的影響.pdf

1、肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC，肝癌）是人類最常見(jiàn)的、高度惡性的腫瘤之一，位居全球惡性腫瘤發(fā)病率的第7位、腫瘤死因的第3位、我國(guó)第2位的腫瘤致死原因。因此，早診斷、早治療，對(duì)提高肝癌患者的生存及預(yù)后極其重要。因此建立肝癌模型對(duì)肝癌研究的具有重要意義。
　　臘腸、咸魚等動(dòng)物性腌制食品是我國(guó)居民喜食的一類食品，但其食用安全性越來(lái)越引起人們的關(guān)注。我國(guó)新頒布的膳食指南（2016年）第四條，推薦適量吃

2、魚、禽、蛋、瘦肉，煙熏和腌制肉類由于加工過(guò)程中易遭受一些致癌物污染，明確提出少吃或不吃。目前大量的流行病學(xué)表明經(jīng)常吃腌肉食品等加工肉制品會(huì)增加肝癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌等消化系統(tǒng)癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，并分析很可能和臘腸、咸魚等動(dòng)物性腌制食品攝入增加可能導(dǎo)致N-亞硝基化合物（英文全稱、縮寫）、苯并芘(BaP)等致癌物質(zhì)攝入增加有關(guān)，但相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室研究資料很少。因此本次研究通過(guò)用臘腸長(zhǎng)期喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)大鼠，研究腌肉食品對(duì)大鼠消化系統(tǒng)的損害作用，并觀察比較亞硝胺

3、污染程度不同的腌肉制品對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠肝臟、食管、胃、結(jié)直腸等消化系統(tǒng)的損害作用，并分析判斷這種損害是否主要是由亞硝胺引起的。
　　目的:
　　1、用二甲基亞硝胺(N-nitrosodimethylamine，NDMA)做為化學(xué)誘導(dǎo)物，建立大鼠肝癌模型。
　　2、研究長(zhǎng)期攝入NDMA超標(biāo)臘腸對(duì)大鼠消化系統(tǒng)的損害作用。
　　3、分析攝入臘腸對(duì)大鼠消化系統(tǒng)的損害作用是否主要是由亞硝胺引起的。
　　方法:
　　1

4、、肝癌模型建立實(shí)驗(yàn):6周齡雄性清潔級(jí)SD大鼠84只，體重198.4±16.2g，按體重隨機(jī)分實(shí)驗(yàn)組（42只）和對(duì)照組（42只），實(shí)驗(yàn)組給予30μg/L二甲基亞硝胺(NDMA)飲用水任其自由飲用12周，12周后改為滅菌自來(lái)水，對(duì)照組一直給予滅菌自來(lái)水。整個(gè)實(shí)驗(yàn)持續(xù)36周，分別在實(shí)驗(yàn)的第2、4、6、8、10、12、16、20、24、28、32，每次處死3只大鼠，36周處死剩下全部大鼠，取肝臟和血清樣本，肝臟立即做病理切片，觀察病理變化。

5、r>　　2、臘腸喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn):6周齡雄性清潔級(jí)SD大鼠180只，體重200.8±23.9g，按體重隨機(jī)分5組，每組36只，分別為空白對(duì)照組（喂以AIN-93G飼料）、實(shí)驗(yàn)A組[喂飼料中臘腸（NDMA含量不超標(biāo)）含量為18％(180g/kg)]、實(shí)驗(yàn)B組[飼料中臘腸(NDMA含量超標(biāo))含量為18％(180g/kg)]、實(shí)驗(yàn)C組[飼料中臘腸(NDMA含量超標(biāo))含量為36％(360g/kg)]和陽(yáng)性對(duì)照組（喂以基礎(chǔ)飼料，給予30μg/LNDMA飲

6、用水任其自由飲用12周，12周后改為滅菌自來(lái)水），連續(xù)喂養(yǎng)33周，分別與第7、17、25、33周時(shí)各組處死8只大鼠，36周處理剩下大鼠，取肝臟、結(jié)腸、直腸、食管、胃并立即做病理切片，觀察病理變化。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)用Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù)，原始數(shù)據(jù)使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行錄入、整理和分析。數(shù)據(jù)的整理分析使用頻數(shù)、均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。各實(shí)驗(yàn)組之間的肝炎評(píng)分和肝纖維化評(píng)分比較采用t檢驗(yàn)或方差分析。
　　

7、結(jié)果:
　　1、肝癌模型建立實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)組大鼠肝組織切片在第6、16、24、32周時(shí)陽(yáng)性組三只大鼠都分別出現(xiàn)了典型的肝炎、肝纖維化、肝硬化、肝癌的改變，并且整個(gè)誘導(dǎo)過(guò)程時(shí)間變化趨勢(shì)明顯，呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間梯度。
　　2、臘腸喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn):
　　空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)A組、B組、C組大鼠和陽(yáng)性對(duì)照組肝組織病理切片在第7、17、25和33周的肝炎評(píng)分結(jié)果如下:空白對(duì)照組:0±0→0±0→0.55±0.73→1.31±0.94;A組:0.

8、25±0.71→0.34±0.68→0.73±0.98→2.43±0.89;B組:3.88±0.83→7.36±0.79→9.42±0.76→12.64±0.83;C組:7.99±0.87→10.91±0.84→12.51±0.98→15.92±0.87;陽(yáng)性對(duì)照組:11.11±0.96→14.32±0.87→15.43±0.92→17.65±0.99。
　　將各實(shí)驗(yàn)組的第7、17、25和33周的肝炎評(píng)分分別與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的空白對(duì)照

9、組實(shí)驗(yàn)大鼠的肝炎評(píng)分進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)B組和C組的肝炎評(píng)分均高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且C組大鼠肝組織肝炎評(píng)分都比B組高;實(shí)驗(yàn)A組和B組大鼠肝組織病理切片的肝炎評(píng)分，在四個(gè)不同的時(shí)期差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且B組大鼠肝組織肝炎評(píng)分都比A組高;實(shí)驗(yàn)A組大鼠肝組織病理切片在第7、17和25周的肝炎評(píng)分與空白對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而在第33周的肝炎評(píng)分與空白對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01

10、)。
　　在實(shí)驗(yàn)第33周時(shí)，空白對(duì)照組中3(37.5％)只大鼠為肝炎，實(shí)驗(yàn)A組中5(62.5％)只大鼠出現(xiàn)了肝炎;實(shí)驗(yàn)B組中6(75％)只老鼠出現(xiàn)了肝炎，2(25％)只大鼠出現(xiàn)輕度肝纖維化;實(shí)驗(yàn)C組中2(25％)只大鼠出現(xiàn)了肝炎，5(62.5％)只大鼠出現(xiàn)輕度肝纖維化，1(12.5％)已經(jīng)出現(xiàn)了肝硬化。陽(yáng)性對(duì)照組中2(25％)只大鼠出現(xiàn)肝硬化，6(75％)只大鼠出現(xiàn)了肝癌。
　　空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)A組、B組和C組大鼠的食管、胃

11、、結(jié)腸和直腸組織的病理切片在整個(gè)實(shí)驗(yàn)階段均正常。僅陽(yáng)性對(duì)照組大鼠出現(xiàn)結(jié)腸粘膜炎癥，淋巴組織增生，腸粘膜上皮萎縮等病理改變。
　　結(jié)論:
　　1、以30μg/L NDMA水溶液較長(zhǎng)時(shí)間自由飲水的方式，在第32周成功地誘發(fā)大鼠形成肝細(xì)胞癌。
　　2、NDMA誘發(fā)大鼠肝癌的毒性反應(yīng)和肝臟損傷程度與人肝癌自然發(fā)病的過(guò)程相似，提示NDMA對(duì)肝有明顯的親和力，誘痛率高、較專一，是誘發(fā)肝癌和致癌性強(qiáng)的化學(xué)藥物。
　　3、長(zhǎng)期攝