長期酒精攝入對大鼠肝細(xì)胞凋亡與增殖的影響.pdf

1、該文通過白酒灌胃建立大鼠ALD模型.用HE染色觀察肝臟基本病理學(xué)改變,用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記(terminal-deoxynucleotidly transferase mediated d-UTP nick end labeling, TUNEL)法檢測肝細(xì)胞的凋亡,用免疫組化(Envision法)檢測增殖細(xì)胞核抗原(proliferative cellular nuclear antigen, PCNA),觀察

2、肝細(xì)胞的增殖,用免疫組化法檢測NFκB和COX-2在肝臟中的表達(dá),探討它們在ALD發(fā)病機(jī)制中的作用.方法動物分組與處理:采用健康,性成熟,一級質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的S-D大鼠24只,雌雄各半,體重180-210(196±12)g,按照性別相同,體重相近的原則配對,隨機(jī)分為2組,正常組和酒精組,每組12只.分籠喂養(yǎng).酒精組以56度白酒15ml/kg體重(折合為酒精相當(dāng)于6.72g/kg體重)每日早晨灌胃一次,正常組則以等量生理鹽水灌胃.在第24周末采

3、用股靜脈放血法處死兩組大鼠,取肝臟標(biāo)本于10﹪福爾馬林固定,石蠟包埋,制成5μm切片.用HE染色觀察肝臟基本病理學(xué)改變,TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡,免疫組化(Envision法)檢測PCNA,觀察肝細(xì)胞的增殖,免疫組化法檢測NFκB和COX-2在肝臟的表達(dá).統(tǒng)計(jì)分析:所有數(shù)據(jù)以mean±SD表示,用SPSS10.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件包分析處理,采用t檢驗(yàn),x<'2>檢驗(yàn)(Fisher精確概率檢驗(yàn)法)和Spearman線性相關(guān)

4、分析(以決定系數(shù)r<'2>表示相關(guān)強(qiáng)度),P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性差異.結(jié)論一、在ALD中,大鼠肝細(xì)胞凋亡增多.酒精誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡,與炎細(xì)胞的浸潤有一定的關(guān)聯(lián).二、在ALD中,大鼠肝細(xì)胞增殖活躍.正常情況下,肝細(xì)胞凋亡與增殖之間存在著動態(tài)平衡,長期酒精攝入后,這種動態(tài)平衡可被破壞.肝細(xì)胞凋亡在酒精誘導(dǎo)的肝損傷再生中具有重要意義.三、NFκB參與ALD中肝細(xì)胞凋亡與增殖的調(diào)控.在ALD中,肝臟COX-2的表達(dá)和NFκB的活化呈正