產(chǎn)CLA植物乳桿菌誘變后LAI基因mRNA差異性分析.pdf

1、共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一種不飽和脂肪酸，具有抗癌，抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、增強(qiáng)免疫力、提高骨骼密度、防治糖尿病、降低膽固醇、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育等生理功能。CLA主要來(lái)源于反芻動(dòng)物食品，但牛乳中的CLA水平相當(dāng)?shù)?。添加化學(xué)合成的CLA可以提高乳中CLA含量，但是副產(chǎn)物難以處理，甚至有些化學(xué)原料會(huì)有一定的毒性。自然界許多微生物能夠利用自身的酶將亞油酸（linoleic acid，LA）轉(zhuǎn)化成 CL

2、A。目前，人們將獲得 CLA的注意力更多地轉(zhuǎn)向了可食用的微生物，植物乳桿菌就是其中的一種。
　　本研究從實(shí)驗(yàn)室保藏的植物乳桿菌P8出發(fā)，利用N+離子束誘變技術(shù)對(duì)其進(jìn)行誘變處理，篩選出CLA產(chǎn)量下降的負(fù)突變菌株，進(jìn)行50代的穩(wěn)定遺傳?？寺∫吧途陙営退岙悩?gòu)酶基因，構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)負(fù)突變菌株和野生型菌株LAI基因mRNA表達(dá)的差異性。為探索產(chǎn)生CLA的分子基礎(chǔ)提供理論依據(jù)，也為大力開(kāi)發(fā)我區(qū)乳酸菌資源生產(chǎn)富含C

3、LA保健乳提供技術(shù)支撐。
　　研究結(jié)果表明:
　　（1）在真空度為10-3Pa，能量為15-20keV，束流為15mA，采用脈沖方式，離子束注入劑量為30~190×2.6×1013N+/cm29個(gè)梯度分別處理樣品，得到“馬鞍型”存活曲線(xiàn)。
　?。?）誘變處理后每個(gè)處理隨機(jī)挑取30個(gè)菌，得到正突變菌株共36株，負(fù)突變菌株共66株，其中最高產(chǎn) CLA正突變菌株和最低產(chǎn) CLA負(fù)突變株產(chǎn) CLA濃度分別為0.2751mg/m

4、L和0.0330mg/mL，轉(zhuǎn)化率為27.51％和3.30%。
　?。?）負(fù)突變菌株進(jìn)行50次的傳代后，有5株負(fù)突變菌株遺傳穩(wěn)定性良好。
　?。?）穩(wěn)定遺傳的5株負(fù)突變菌株與野生型菌株之間的起始拷貝數(shù)差異顯著，(p<0.05)，其中9-6，9-7，9-25，9-26，4株負(fù)突變菌株的起始拷貝數(shù)顯著低于野生型菌株(p<0.05)，9-8的起始拷貝數(shù)顯著高于野生型菌株(p<0.05)。5株負(fù)突變菌株的起始拷貝數(shù)之間差異也顯著，初