不同培養(yǎng)條件對植物乳桿菌P8產(chǎn)共軛亞油酸及LAI基因mRNA表達水平的影響.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是幾何構(gòu)型和共軛雙鍵的十八碳二烯酸上存在差異的，具有多種生物活性的天然脂肪酸。
　　近些年來的研究發(fā)現(xiàn)，共軛亞油酸作為一種不飽和脂肪酸，具有抗癌、提高免疫力、增加肌肉、降低脂肪和膽固醇、防治糖尿病、提高骨骼的密度、抗動脈粥樣硬化等多種生理功能，同時在保健品、醫(yī)學領(lǐng)域、食品、化妝品和飼料工業(yè)等領(lǐng)域有著重要的功能和廣闊的實際應用前景。研究亞油酸異構(gòu)酶(Linolei

2、c Acid Isomerase LAI)作為共軛亞油酸生物轉(zhuǎn)化的一種關(guān)鍵酶有著至關(guān)重要的意義。
　　迄今為止，在亞油酸異構(gòu)酶(LAI)的結(jié)構(gòu)、功能、性質(zhì)和調(diào)控各方面的研究，大多數(shù)利用基因工程和生物工程方面的技術(shù)對亞油酸異構(gòu)酶(LAI)進行多方面優(yōu)化處理。目前，研究表明微生物可以利用自身的條件將亞油酸(LA)，通過亞油酸異構(gòu)酶(LAI)專一性的催化作用轉(zhuǎn)化為共軛亞油酸(CLA)，近年來在這方面的生物合成法研究甚少，已經(jīng)成為未來該領(lǐng)

3、域的發(fā)展趨勢。
　　本研究以植物乳桿菌 P8(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum P8)作為研究菌株，以培養(yǎng)時間、接種量、碳源、氮源、LA濃度、pH值、培養(yǎng)溫度等誘變條件為衡量指標，采用單因素和正交試驗確定了植物乳桿菌 P8的最佳發(fā)酵條件。實驗結(jié)果表明，產(chǎn)共軛亞油酸的最佳發(fā)酵條件是：培養(yǎng)時間為22h、亞油酸(LA)添加量為0.9 mg/mL、接種量為1.5％、氮源采用2g/L的胰蛋白胨，

4、碳源采用3g/L的葡萄糖。在此條件下，植物乳桿菌 P8產(chǎn)共軛亞油酸的最高產(chǎn)量可達0.0692 mg/mL。
　　利用正己烷萃取法、分光光度法、Trizol法、反轉(zhuǎn)錄 PCR法、Real-time PCR等技術(shù)，研究了植物乳桿菌 P8 LAI基因的mRNA表達情況。對不同條件培養(yǎng)的16組(正交試驗)植物乳桿菌 P8進行總 RNA的提取。瓊脂糖凝膠電泳和分光光度法檢測 RNA的完整性和純度，OD260/OD280的比值在1.90-2.

5、10之間，完全滿足 RT-PCR、熒光定量PCR等分子生物學操作的要求。設計特異性的引物，用于16組樣品的反轉(zhuǎn)錄 PCR擴增，將反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進行 Real-time PCR定量分析，檢測16組樣品的LAI基因mRNA相對表達量。研究表明，LAI基因不同培養(yǎng)條件下的植物乳桿菌 P8中都有表達，但表達量不同。其中第4、6、12組 LAI基因的相對表達量較低，第1、5、10組 LAI基因的相對表達量較高，表明不同培養(yǎng)條件對植物乳桿菌