轉化生長因子-β1對人支氣管上皮細胞間充質轉化及Six1基因表達影響的研究.pdf

1、目的:探討TGF-β1對人支氣管上皮細胞間充質轉化及Six1基因表達的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)人支氣管上皮細胞（16HBE），構建上皮-間充質轉化模型。采用倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)的變化；采用Real-time PCR檢測E-鈣黏蛋白、波形蛋白、α-肌動蛋白、纖維黏連蛋白及Six1基因 mRNA表達的情況；采用Westernblotting檢測E-鈣黏素、波形蛋白、α-肌動蛋白、纖維黏連蛋白及Six1蛋白的表達變化。
　

2、　結果:1.倒置顯微鏡結果示:對照組細胞呈單層，細胞間連接較為緊密；處理組A細胞形態(tài)變化不明顯；處理組B部分細胞出現(xiàn)肥大、拉長，細胞間連接緊密性下降；處理組C細胞形態(tài)變化較為明顯，呈梭行，同時細胞間隙增大，喪失典型的鋪路石樣特征。
　　2.RT-PCR檢測結果示：對照組細胞可正常表達E-鈣黏素基因、波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因、α-肌動蛋白基因及Six1基因 mRNA；與對照組相比較，處理組A其E-鈣粘素基因、α-肌動蛋白基因m

3、RNA表達量降低（P值分別為0.862、0.566，均＞0.05），Six1基因mRNA表達量增高（P值為0.102＞0.05），差異均無統(tǒng)計學意義，波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因 mRNA表達量顯著升高（P值分別為0.003、0.006＜0.01），差異有統(tǒng)計學意義。處理組B其E-鈣粘素基因mRNA表達量明顯減少（P=0.042），波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因、α-肌動蛋白基因及Six1基因 mRNA表達量均顯著增加（P=0.000

4、、0.001、0.031、0.023，均小于0.05），與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義。處理組C其E-鈣粘素基因mRNA表達量顯著減少（P=0.004＜0.01），波形蛋白基因、纖維黏連蛋白基因、α-肌動蛋白基因及Six1基因 mRNA表達量均明顯增加（P=0.004、0.003、0.023、0.004，均小于0.05），與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義。
　　3.Westernblot檢測結果示：對照組細胞能夠正常表達E-鈣粘素、

5、α-肌動蛋白、纖維黏連蛋白、波形蛋白及Six1蛋白。與對照組相比，處理組A細胞中E-鈣粘素表達減少（P=1.023＞0.05），α-肌動蛋白、纖維黏連蛋白及波形蛋白的表達量增高（P值分別為0.789、0.542、0.624，均＞0.05），但差異均無統(tǒng)計學意義，Six1蛋白表達量增加（P=0.028＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義；處理組B細胞中E-鈣粘素表達量明顯減少（P=0.011＜0.05），α-肌動蛋白、纖維黏連蛋白、波形蛋白及S

6、ix1蛋白的表達量均顯著增加（P值分別為0.002、0.001、0.004、0.009均＜0.01），與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義；處理組C細胞中E-鈣粘素表達量顯著減少（P=0.009＜0.01），α-肌動蛋白、波形蛋白及Six1蛋白的表達量顯著增加（P值分別為0.008、0.003、0.007，均＜0.01），纖維黏連蛋白表達量明顯增加（P值為0.017＜0.05），與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義。且隨TGF-β1作用時間越長，S