支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴增及其對表達水平影響的研究.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴增及其對表達水平影響的研究姓名：茹莉莉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：張開泰20060501支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴增及其對表達水平影響的研究中文摘要支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴增及其對表達水平影響的研究摘要基因組不穩(wěn)定是肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的早期事件，因此而引起的基因拷貝數(shù)的擴增和丟失常?？赡艹蔀榧毎麗盒赞D(zhuǎn)化的重要分子機理。本研

2、究旨在篩選支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中拷貝數(shù)擴增的基因，驗證并分析基因的高拷貝對其RNA及蛋白質(zhì)表達的影響。本實驗利用業(yè)已建立的支氣管上皮細胞體外惡性轉(zhuǎn)化模型，通過cDNAmicroarray—CGH技術(shù)對支氣管上皮來源的永生化細胞和癌變細胞的基因拷貝數(shù)進行了檢測；采用real—timePCR及免疫組化技術(shù)驗證和分析了DNA拷貝數(shù)，RNA及蛋白質(zhì)表達水平的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在永生化BEP2D細胞中染色體擴增區(qū)域分布在5q313，9q3

3、2～331，14q222231，19p1312～1313，20q1312～1331；；惡性轉(zhuǎn)化BERP35T2細胞中的擴增區(qū)域集中在lpl2～131，5q331，5q313，9q32，19p1312～1313。其中5q313，9q32，19p1312～1313是兩種細胞系中的共同擴增區(qū)域。在永生化BEP2D細胞和惡性轉(zhuǎn)化BERP35T2細胞中篩選到的646個異?？截悢?shù)的基因中，有496個基因發(fā)生了擴增。對PCNA、p53以及GADD45

4、A的real—timePCR的驗證結(jié)果顯示，這些基因在永生化和惡性轉(zhuǎn)化細胞中的拷貝數(shù)均明顯高于正常胎盤DNA，與芯片結(jié)果一致。在RNA水平上，PCNA、p53以及GADD45A表達豐度高于正常肺組織；在蛋白質(zhì)水平上的觀測結(jié)果也顯示，PCNA和P53呈現(xiàn)強陽性表達。此外，基因序列分析發(fā)現(xiàn)，p53第八外顯子位于1381lbp處的堿基發(fā)生點突變。以上結(jié)果表明，在支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中，基因拷貝數(shù)擴增可能是影響某些重要基因表達水平和生物學(xué)