支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴(kuò)增及其對(duì)表達(dá)水平影響的研究.pdf

1、中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴(kuò)增及其對(duì)表達(dá)水平影響的研究姓名：茹莉莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：張開泰20060501支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴(kuò)增及其對(duì)表達(dá)水平影響的研究中文摘要支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中基因拷貝數(shù)的擴(kuò)增及其對(duì)表達(dá)水平影響的研究摘要基因組不穩(wěn)定是肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的早期事件，因此而引起的基因拷貝數(shù)的擴(kuò)增和丟失常?？赡艹蔀榧?xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要分子機(jī)理。本研

2、究旨在篩選支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中拷貝數(shù)擴(kuò)增的基因，驗(yàn)證并分析基因的高拷貝對(duì)其RNA及蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。本實(shí)驗(yàn)利用業(yè)已建立的支氣管上皮細(xì)胞體外惡性轉(zhuǎn)化模型，通過cDNAmicroarray—CGH技術(shù)對(duì)支氣管上皮來源的永生化細(xì)胞和癌變細(xì)胞的基因拷貝數(shù)進(jìn)行了檢測(cè)；采用real—timePCR及免疫組化技術(shù)驗(yàn)證和分析了DNA拷貝數(shù)，RNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在永生化BEP2D細(xì)胞中染色體擴(kuò)增區(qū)域分布在5q313，9q3

3、2～331，14q222231，19p1312～1313，20q1312～1331；；惡性轉(zhuǎn)化BERP35T2細(xì)胞中的擴(kuò)增區(qū)域集中在lpl2～131，5q331，5q313，9q32，19p1312～1313。其中5q313，9q32，19p1312～1313是兩種細(xì)胞系中的共同擴(kuò)增區(qū)域。在永生化BEP2D細(xì)胞和惡性轉(zhuǎn)化BERP35T2細(xì)胞中篩選到的646個(gè)異?？截悢?shù)的基因中，有496個(gè)基因發(fā)生了擴(kuò)增。對(duì)PCNA、p53以及GADD45

4、A的real—timePCR的驗(yàn)證結(jié)果顯示，這些基因在永生化和惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的拷貝數(shù)均明顯高于正常胎盤DNA，與芯片結(jié)果一致。在RNA水平上，PCNA、p53以及GADD45A表達(dá)豐度高于正常肺組織；在蛋白質(zhì)水平上的觀測(cè)結(jié)果也顯示，PCNA和P53呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。此外，基因序列分析發(fā)現(xiàn)，p53第八外顯子位于1381lbp處的堿基發(fā)生點(diǎn)突變。以上結(jié)果表明，在支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中，基因拷貝數(shù)擴(kuò)增可能是影響某些重要基因表達(dá)水平和生物學(xué)