沒食子物質(zhì)基礎(chǔ)及其主要活性成分的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　沒食子（Turkish galls）具有固澀、收斂、燥濕、止血及消炎等作用，是消化系統(tǒng)及牙科疾病的維吾爾族傳統(tǒng)藥物，也是新疆維吾爾自治區(qū)地方醫(yī)院醫(yī)院制劑潰結(jié)安的單味原料藥，用于治療潰瘍性結(jié)腸炎有良好的效果。近年來，潰瘍性結(jié)腸炎疾病的患病人數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢，而目前市場上用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物種類少，并且藥物的副作用大。然而，通過臨床試驗，新疆維吾爾傳統(tǒng)藥物西依帕潰結(jié)安，不僅保證了治療效果，并且副作用較小，而備受矚目。但

2、是目前關(guān)于潰結(jié)安的單味原料藥沒食子的國內(nèi)外研究報道的文獻(xiàn)極少，缺乏深入系統(tǒng)地研究，不利于沒食子的進(jìn)一步開發(fā)與利用。本課題擬對沒食子藥材進(jìn)行化學(xué)成分分析、血漿和尿液中代謝物鑒定分析以及對其主要活性成分沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子酰基-β-D-葡萄糖進(jìn)行藥代動力學(xué)研究，期望豐富沒食子藥材的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，為全面、系統(tǒng)地控制沒食子藥材的質(zhì)量提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，并且了解其活性成分在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特性，為沒食子的深入開發(fā)、

3、研究以及臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)支持。
　　方法:
　　1.沒食子藥材化學(xué)成分的定性分析
　　采用液相色譜-電噴霧電離-離子阱-飛行時間質(zhì)譜法(High-performance liquidchromatography-electrospray ionization-ion trap-time-of-flight-tandem massspectrometry，HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS）對沒食子化學(xué)成分進(jìn)

4、行定性分析，通過對各個色譜峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行解析，對比已知化合物的裂解規(guī)律，綜合保留時間、紫外數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)及參考文獻(xiàn)報道數(shù)據(jù)對各個色譜峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　2.沒食子在血漿和尿液中的代謝物成分分析
　　運用HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS法對血漿和尿液中的代謝物進(jìn)行定性分析，經(jīng)過對每個化合物的質(zhì)譜信息進(jìn)行解析，參考已知物質(zhì)的斷裂規(guī)律，并綜合考慮保留時間、質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及參考文獻(xiàn)的報道對各個物質(zhì)進(jìn)行鑒定。
　　3.

5、沒食子中主要活性成分沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖的藥代動力學(xué)研究
　　運用高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，建立能夠同時測定大鼠血漿中沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖的LC-MS/MS法，并將其應(yīng)用于沒食子中主要活性成分的藥代動力學(xué)研究。
　　結(jié)果:
　　1.沒食子藥材化學(xué)成分的定性分析
　　HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS定性分析，

6、從沒食子提取物中共鑒定得到21個化合物，分別為4個酚酸類、15個沒食子鞣質(zhì)類化合物以及2個其他類化合物，其中有13個化合物為首次從沒食子中發(fā)現(xiàn)。
　　2.沒食子在血漿和尿液中的代謝物成分分析
　　通過HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS定性分析，從沒食子灌胃給藥大鼠后，在大鼠血漿和尿液中共鑒定得到22個化合物，包括沒食子酸類、雙沒食子酸類、Benzoic acid,3,5-dihydroxy-4-[(3,4,5-tri

7、hydroxybenzoyl) oxy]-,methyl ester以及其他類化合物，其中有21個化合物為首次從沒食子的代謝物中發(fā)現(xiàn)。
　　3.沒食子中主要成分沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子酰基-β-D-葡萄糖的藥代動力學(xué)研究
　　本實驗首次建立一個同時測定大鼠血漿中沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子酰基-β-D-葡萄糖的LC-MS/MS法。該方法的方法學(xué)考察均符合要求，且靈敏、選擇性好、

8、樣品處理方法簡便、分析時間短，成功應(yīng)用于沒食子灌胃給藥后大鼠血漿中沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖的藥代動力學(xué)研究。大鼠灌胃給予沒食子提取液后，沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖均吸收迅速、消除緩慢。沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖的達(dá)峰濃度Cmax和藥時曲線下面積AUC0→t分別為32.5±41.51μg/mL和97.12±

9、76.78μg.h/mL，1039.88±689.88μg/mL和3822.43±1855.13μg·h/mL,1.68±1.51μg/mL和6.4±4.22μg·h/mL。
　　結(jié)論:
　　本課題首次建立一個HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS法對沒食子中化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，為全面、系統(tǒng)地控制沒食子藥材及其醫(yī)院制劑的質(zhì)量提供了一個有效的新方法;首次報道沒食子中三個主要活性成分沒食子酸、沒食子酸甲酯和1，3，6-三-