沒(méi)食子物質(zhì)基礎(chǔ)及其主要活性成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　沒(méi)食子（Turkish galls）具有固澀、收斂、燥濕、止血及消炎等作用，是消化系統(tǒng)及牙科疾病的維吾爾族傳統(tǒng)藥物，也是新疆維吾爾自治區(qū)地方醫(yī)院醫(yī)院制劑潰結(jié)安的單味原料藥，用于治療潰瘍性結(jié)腸炎有良好的效果。近年來(lái)，潰瘍性結(jié)腸炎疾病的患病人數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，而目前市場(chǎng)上用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物種類少，并且藥物的副作用大。然而，通過(guò)臨床試驗(yàn)，新疆維吾爾傳統(tǒng)藥物西依帕潰結(jié)安，不僅保證了治療效果，并且副作用較小，而備受矚目。但

2、是目前關(guān)于潰結(jié)安的單味原料藥沒(méi)食子的國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道的文獻(xiàn)極少，缺乏深入系統(tǒng)地研究，不利于沒(méi)食子的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)與利用。本課題擬對(duì)沒(méi)食子藥材進(jìn)行化學(xué)成分分析、血漿和尿液中代謝物鑒定分析以及對(duì)其主要活性成分沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究，期望豐富沒(méi)食子藥材的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，為全面、系統(tǒng)地控制沒(méi)食子藥材的質(zhì)量提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，并且了解其活性成分在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特性，為沒(méi)食子的深入開(kāi)發(fā)、

3、研究以及臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)支持。
　　方法:
　　1.沒(méi)食子藥材化學(xué)成分的定性分析
　　采用液相色譜-電噴霧電離-離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜法(High-performance liquidchromatography-electrospray ionization-ion trap-time-of-flight-tandem massspectrometry，HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS）對(duì)沒(méi)食子化學(xué)成分進(jìn)

4、行定性分析，通過(guò)對(duì)各個(gè)色譜峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行解析，對(duì)比已知化合物的裂解規(guī)律，綜合保留時(shí)間、紫外數(shù)據(jù)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)及參考文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)對(duì)各個(gè)色譜峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　2.沒(méi)食子在血漿和尿液中的代謝物成分分析
　　運(yùn)用HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS法對(duì)血漿和尿液中的代謝物進(jìn)行定性分析，經(jīng)過(guò)對(duì)每個(gè)化合物的質(zhì)譜信息進(jìn)行解析，參考已知物質(zhì)的斷裂規(guī)律，并綜合考慮保留時(shí)間、質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及參考文獻(xiàn)的報(bào)道對(duì)各個(gè)物質(zhì)進(jìn)行鑒定。
　　3.

5、沒(méi)食子中主要活性成分沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖的藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　運(yùn)用高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，建立能夠同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖的LC-MS/MS法，并將其應(yīng)用于沒(méi)食子中主要活性成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　結(jié)果:
　　1.沒(méi)食子藥材化學(xué)成分的定性分析
　　HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS定性分析，

6、從沒(méi)食子提取物中共鑒定得到21個(gè)化合物，分別為4個(gè)酚酸類、15個(gè)沒(méi)食子鞣質(zhì)類化合物以及2個(gè)其他類化合物，其中有13個(gè)化合物為首次從沒(méi)食子中發(fā)現(xiàn)。
　　2.沒(méi)食子在血漿和尿液中的代謝物成分分析
　　通過(guò)HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS定性分析，從沒(méi)食子灌胃給藥大鼠后，在大鼠血漿和尿液中共鑒定得到22個(gè)化合物，包括沒(méi)食子酸類、雙沒(méi)食子酸類、Benzoic acid,3,5-dihydroxy-4-[(3,4,5-tri

7、hydroxybenzoyl) oxy]-,methyl ester以及其他類化合物，其中有21個(gè)化合物為首次從沒(méi)食子的代謝物中發(fā)現(xiàn)。
　　3.沒(méi)食子中主要成分沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖的藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　本實(shí)驗(yàn)首次建立一個(gè)同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖的LC-MS/MS法。該方法的方法學(xué)考察均符合要求，且靈敏、選擇性好、

8、樣品處理方法簡(jiǎn)便、分析時(shí)間短，成功應(yīng)用于沒(méi)食子灌胃給藥后大鼠血漿中沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖的藥代動(dòng)力學(xué)研究。大鼠灌胃給予沒(méi)食子提取液后，沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子酰基-β-D-葡萄糖均吸收迅速、消除緩慢。沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-O-沒(méi)食子酰基-β-D-葡萄糖的達(dá)峰濃度Cmax和藥時(shí)曲線下面積AUC0→t分別為32.5±41.51μg/mL和97.12±

9、76.78μg.h/mL，1039.88±689.88μg/mL和3822.43±1855.13μg·h/mL,1.68±1.51μg/mL和6.4±4.22μg·h/mL。
　　結(jié)論:
　　本課題首次建立一個(gè)HPLC-ESI-IT-TOF-MS/MS法對(duì)沒(méi)食子中化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，為全面、系統(tǒng)地控制沒(méi)食子藥材及其醫(yī)院制劑的質(zhì)量提供了一個(gè)有效的新方法;首次報(bào)道沒(méi)食子中三個(gè)主要活性成分沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，3，6-三-