生脈注射液化療增敏作用及其主要活性成分的研究.pdf

1、目的:
　　 本研究擬通過分析生脈注射液聯(lián)合吉西他濱、順鉑、紫杉醇及表阿霉素等不同腫瘤化療藥物對肺癌(A549)、胃癌(SGC-7901)、乳腺癌(MCF-7)及肝癌（HepG-2）等不同腫瘤細(xì)胞的增敏作用，綜合比較生脈注射液對不同腫瘤細(xì)胞的減毒增敏效果，并對其增敏作用的分子機(jī)制及活性成分進(jìn)行初步的研究，為臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1、通過細(xì)胞增殖抑制試驗MTT比色法測定較低體積分?jǐn)?shù)生脈注射液結(jié)合不

2、同臨床典型化療藥物作用于不同腫瘤細(xì)胞后對于化療藥物的增效作用;通過流式細(xì)胞法測定化療藥物在結(jié)合生脈注射液后對細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的影響。采用RT-PCR方法檢測生脈注射液對于MDR1基因表達(dá)的影響。
　　 2、再次通過細(xì)胞增殖抑制試驗MTT比色法測定生脈注射液中紅參及五味子的10種已知成分標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)合表阿霉素作用于肝癌細(xì)胞HepG-2的化療增敏效果，進(jìn)而明確其主要活性成分。
　　 結(jié)果:
　　 1、在較低體積分?jǐn)?shù)下

3、，生脈注射液聯(lián)合吉西他濱、順鉑、紫杉醇和表阿霉素作用于不同腫瘤細(xì)胞A549、SGC-7901、MCF-7和HepG-2后對不同化療藥物均具有增敏效果，其中生脈注射液聯(lián)合表阿霉素增敏效果最為顯著，生脈注射液使肝癌細(xì)胞HepG-2對表阿霉素的敏感性提高了16倍。通過MTT試驗選出最敏感組合:生脈注射液與表阿霉素結(jié)合作用于肝癌細(xì)胞HepG-2，之后采用此組合進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡實驗。通過流式細(xì)胞法測定的細(xì)胞周期與凋亡實驗結(jié)果顯示，低體積分?jǐn)?shù)

4、的生脈注射液不影響腫瘤細(xì)胞HepG-2的周期和凋亡，但與表阿霉素聯(lián)用后，能夠明顯增強表阿霉素對HepG-2細(xì)胞周期和凋亡的作用效果。RT-PCR的結(jié)果顯示，與對照組相比較，單用生脈注射液可降低MDR1的基因表達(dá)，單用表阿霉素組能夠提高M(jìn)DR1的表達(dá)，但不具統(tǒng)計學(xué)意義，兩者聯(lián)合用藥組則是顯著降低了MDR1基因的表達(dá)。由此可知生脈注射液能夠降低MDR1基因的轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而下調(diào)外排泵蛋白P-gp的表達(dá)，進(jìn)而提高表阿霉素在細(xì)胞內(nèi)的作用濃度，提高

5、表阿霉素的作用效果。
　　 2、再次通過細(xì)胞增殖抑制試驗MTT法測定的生脈注射液活性成分實驗結(jié)果顯示，當(dāng)只用紅參中的主要成分人參皂苷(1～8)作為實驗藥物時，增敏作用不到生脈注射液增敏效果的一半，而當(dāng)添加了五味子中主要成分五味子乙素(9)及五味子醇甲(10)后增敏效果大大提升，幾乎與生脈注射液的增敏效果一致，故可知，紅參中主要成分人參皂苷(1～8)，及五味子主要成分中五味子乙素(9)及醇甲(10)為化療增效作用的主要活性成分，而